高效液相色谱法测定江津栀子中栀子苷含量＊

黄群莲，唐 灿，张彦燕，李云鹏，赵 剑

(1.泸州医学院附属医院药剂科，四川 泸州 646000;2.泸州医学院药学院，四川 泸州 646000)

栀子为茜草科植物栀子 Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，主产于浙江、四川、江西、重庆、湖北等地，具有泻火除烦、清热、凉血解毒之功效，用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮痈等证。现代药理研究证实，栀子具有保肝、利胆、解热、抗炎、抗病原微生物、抗肿瘤、镇静等作用[1-8]。栀子的主要有效成分栀子苷、熊果酸和总有机酸具有良好的药理作用及广阔的应用前景。栀子苷具有缓泻、镇痛、利胆、抗炎、治疗软组织损伤以及抑制胃液分泌和降低胰淀粉酶等作用，还可采用不同条件的发酵将其制成天然食用着色剂栀子蓝和栀子红，也是用于治疗心脑血管、肝胆等疾病和糖尿病的原料药物。为此，笔者采用高效液相色谱法测定江津栀子中栀子苷含量，旨在为建立江津栀子的质量新标准提供参考。

1 仪器与试药

SSI高效液相色谱仪(美国科学系统公司);AS3120A Ultrasonic Cleaner;AP-01P真空泵;Haier BCD-176DA型电冰箱;SHH V21型长风三用电热恒温水浴箱;ZK072型电热真空干燥箱;RE-52B型旋转薄膜蒸发器;AS 701KDT Ultrasonic Cleaner;UV-9200型紫外可见光分光光度计;FA1104W型电子天平;Kodak Easy share Z7590型数位相机。甲醇(分析纯);乙腈色谱纯;多效蒸馏水(泸州医学院附属医院药剂科);栀子苷化学对照品(批号为110742-200516，供含量测定用，中国药品生物制品检定所);栀子产自重庆江津，经课题组鉴定为茜草科植物栀子 Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:UltimateTMC18键合硅胶柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 -水(10∶90);流速:1.0 mL/min，柱温:25℃;波长:238 nm[9]。在此条件下，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

将栀子于60℃减压干燥1 h，粉碎过50目筛，取栀子粗粉，加5倍量甲醇，超声提取60 min，提取3次，滤过，滤液挥至1 mL，转入2 mL容量瓶中，定容，作供试品溶液。精密称取栀子苷化学对照品3.2 mg(60℃减压干燥24 h)，用无水甲醇定容于5 mL容量瓶中，即得质量浓度为0.64 g/L的栀子苷对照品溶液。

2.3 方法学考察

标准曲线绘制:精密吸取对照品溶液 5.0，7.5，10.0，12.5，17.5 μL，置5 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，依法进样，记录色谱图。以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归，得回归方程 Y=-439 843.76+1 012 294.70X，r=0.999 2(n=5)。结果表明，栀子苷进样量在3.2～11.2 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取栀子苷对照品溶液(0.64 g/L)5 μL，连续进样5次，测定蜂面积。结果的 RSD=1.17%(n=5)，表明仪器精密度符合要求。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液5 μL，于3.5 h内每隔30 min测定1次。结果峰面积的 RSD=1.45%(n=8)，表明供试品溶液在3.5 h内较稳定，符合要求。

重现性试验:取样品适量，依法制备供试品溶液并测定。结果栀子苷含量的 RSD=1.789%(n=5)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:分别取栀子苷化学对照品4.5，6.0，9.0 mg各2份，精密称定，加入到已测定栀子苷含量的江津栀子粉末(50目粉末100mg，每1mg栀子苷含量为0.06463mg)中，每次加入2.5mL甲醇，超声提取60 min，提取3次，合并滤液，精密吸取2.5 μL滤液进样，按拟订的色谱条件测定。结果见表1。

表1 栀子苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3份栀子样品，依法制备供试品溶液，精密量取2.5 μL进样，测定峰面积，以干燥品计算3份样品中栀子苷含量。结果栀子干重为(4 370.31±0.228 1)mg，栀子苷含量为(264.743 0±2.527 3)mg，每1 mg药材中栀子苷收率为(6.058±0.058)%。

3 讨论

采用高效液相色谱法测定栀子中栀子苷含量，方法可靠，操作简便，重现性好。该法既可作为栀子含量测定的常规检验方法，又可作为栀子制剂中栀子苷的含量测定方法。

有研究表明，栀子苷含量测定以超声提取法较好，甲醇和80%的乙醇作为提取剂时效果最好[10]。高温有助于栀子苷的溶出，但易导致有效成分被破坏。经试验证明，提取温度以70℃以下比较合适[11]。李志雄等[12]的研究表明，随着温度升高，栀子苷在药材中的含量随时间变化而呈下降趋势，且温度越高，下降幅度越大。常温下栀子苷性质稳定，t0.9=2.83年。因此，在栀子苷的提取过程中，温度不宜过高。提取温度最好在60℃以下，供试品溶液可置0℃冰箱中贮存。与常规提取法相比，超声提取技术能避免高温、高压对有效成分的破坏，但对容器的壁厚薄及放置位置要求较高，否则会影响药材浸出效果;而且，目前超声提取研究大多处于较小规模，若用于大规模生产，还有待于解决有关工程设备的放大问题。

关于流动相的选择，曾试用甲醇-乙腈-0.1%磷酸水溶液(25 ∶5 ∶70)、甲醇 -水 -醋酸(80∶20 ∶0.1)、甲醇 -水(70∶30)等，结果以乙腈-水(10∶90)为流动相时，栀子苷具有良好的线性关系和分离度，表明在此条件下，性质和结构相近的多种栀子环烯醚萜苷能有效分离，测定简便快捷。2005年版《中国药典(一部)》即采用该流动相。

在进行精密度试验时，室外温度高达35℃，室内温度高达28℃。因对照品溶液是由甲醇配制而成，在如此高温下，甲醇具有很强的挥发性，故稳定性和精密度试验的 RSD相对较大，但仍在正常范围内。因此，在测定时最好控制室温在20～25℃。

影响栀子苷含量的因素主要有采收时间和炮制水平。通过试验表明，栀子幼果的栀子苷含量比成熟果实的含量要高。其主要原因可能是成熟果实中栀子苷转变为栀子酸或其他物质，栀子苷的含量降低，但仍有待于进一步研究。不同的炮制方法、温度和时间对栀子苷的含量也有影响。栀子直接干燥后，栀子苷含量降低，而经笼蒸或水烫后再干燥的含量变化不大，表明栀子经笼蒸或水烫，基本起到了杀酶保苷的作用。对于各栀子炮制品，随着炮制的程度(炒黄、炒焦、炒碳)越深，其栀子苷量越低[13]。

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