不同产地朱砂莲中马兜铃酸A的含量比较

任华忠，万 丽，王书林，王金鹏

(1.成都中医药大学峨眉学院，四川 峨眉山 614201;2.成都中医药大学药学院，四川 成都 611137)

朱砂莲为马兜铃科马兜铃属植物四川朱砂莲 Aristolochia cinnabarina C.Y.Cheng et J.L.Wu的干燥块根，是四川、广西、云南和贵州习用的一种止痛中药，古称辟虺雷，历代本草著作如《证类本草》《本草品汇精要》《本草纲目》以及《植物名实图考》等均有收载[1]。朱砂莲性寒，味苦、辛，具有清热解毒、消肿止痛功效，临床主要用于治疗肠炎、痢疾、胃及十二指肠溃疡、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、痈疖肿毒、外伤出血等。现代药理学研究结果表明，朱砂莲主要具有镇痛作用，也具有消炎和解热、抗癌、抗感染、增强机体免疫机能等方面的作用;但朱砂莲及其制剂有明显的肾毒性[2]，这与其含有的马兜铃酸类物质有关。笔者采用高效液相色谱法测定了不同产地朱砂莲中马兜铃酸A的含量[3]，旨在为朱砂莲的安全使用和质量标准的建立提供基础性研究。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪，包括自动脱气机、自动进样器、二元泵、柱温箱、2993型紫外检测器，Empower2 Chromatography Data Software色谱工作站(美国Waters公司);UV-2450型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司);KQ-250 B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。朱砂莲药材样品8批，分别来源于四川省的马边彝族自治县、崇州市、峨眉山市和重庆市的涪陵区、万州区，各批次样品经成都中医药大学峨眉学院邬家林教授鉴定，为马兜铃科马兜铃属植物四川朱砂莲 Aristolochia cinnabarina C.Y.Cheng et J.L.Wu的干燥块根，生长年限均为4年，加工方法均为蒸制;马兜铃酸A对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110746-200406);乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Waters C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:水 -乙腈(70∶30);流速:1 mL/min;检测波长:250 nm;柱温:27℃。在此色谱条件下，各样品溶液中的马兜铃酸A峰与其他组分峰能达到基线分离，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取马兜铃酸A对照品适量，加乙醇使溶解，制成质量浓度为0.073 g/L的对照品溶液。取本品粉末约1 g，精密称定，精密加入甲醇-甲酸(98∶2)100 mL，称定质量，回流90 min，放冷，再称定质量，用甲醇-甲酸(98∶2)补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取滤液20 mL，水浴蒸干，残渣用乙醇50 mL溶解，再用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取质量浓度为0.73 g/L的对照品溶液1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 mL，用乙醇稀释并定容至 10 mL，进样 10 μL，记录色谱图，测定峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标、马兜铃酸A进样量(X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=36 283.478 X+656 353.898，r=0.998(n=10)。结果表明，马兜铃酸A进样量在730～7 300 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密量取马兜铃酸A对照品溶液，加乙醇稀释至0.036 5 g/L。精密吸取该对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定马兜铃酸A峰面积，结果的 RSD为1.34%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取供试品溶液，室温下放置，分别于 0，2，4，6，8，12 h时测定峰面积。结果6次测得的马兜铃酸A峰面积的 RSD为1.46%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验:取样品约1 g，共6份，精密称定，照供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量。结果6次测得的马兜铃酸A含量的 RSD为1.52%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取样品约0.5 g，共6份，精密称定，分别置圆底烧瓶中，各精密加入一定量的马兜铃酸A对照品，照供试品溶液制备方法制备溶液，测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

表2 不同产地朱砂莲中马兜铃酸A的含量(n=3)

2.4 样品含量测定

分别精密吸取对照品溶液和各批次供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定含量，结果见表2。

3 讨论

从文献报道和临床应用的实际情况来看，马兜铃酸A是朱砂莲致肾损害的主要毒性成分，且存在一定的量毒关系[4]。本试验结果表明，不同产地朱砂莲的马兜铃酸A含量有显著性差异(P＜0.05)，其中含量较高的是栽培4年的峨眉山朱砂莲，含量达0.241%，而各产地朱砂莲的平均含量为0.206%。近年来，由于陆续有马兜铃科植物致肾损害的报道，朱砂莲在药用方面的价值不断受到质疑[2]。动物实验得出的马兜铃酸安全剂量为5 mg/kg，就本次试验结果来看，对来自各主要产地的朱砂莲如能合理使用(《中华本草》规定为研末内服，每次0.5～1 g，每日2次)，则其马兜铃酸摄入量远低于中毒剂量[5]。考虑到朱砂莲在西南各省民间使用历史悠久，疗效确切，笔者认为不宜对朱砂莲及其制剂采取完全否定的态度;但作为已明确不良反应的药物，应当慎重使用，可在药品标准中注明使用禁忌和注意事项等内容，以免使用不当造成严重不良反应。

[1]邬家林.朱砂莲的考证[J].中药材，1985，8(5):46.

[2]黄仁发，史 伟，吴金玉，等.朱砂莲中毒致急性马兜铃酸肾病[J].药物不良反应杂志，2007，9(6):412.

[3]路金才，韩 娜，杜晓曦，等.马兜铃酸的测定方法现状分析[J].中草药，2006，37(7):1 113.

[4]徐晓月，张陆勇，江振洲，等.马兜铃酸Ⅰ肾毒性的实验研究[J].中国生化药物杂志，2006，27(6):336.

[5]梅全喜，高玉桥，胡世林.应理性对待含马兜铃酸类中药[J].中国药房，2006，17(7):554.