中国大麦中赭曲霉毒素污染现状初探

唐坤甜，赵彩云，谷方红

(中国食品发酵工业研究院 酿酒工程部，北京 100027)

20世纪70年代以来，在世界范围内，各种真菌毒素在啤酒酿造过程中不断被发现，赭曲霉毒素A(ochratoxin A，OTA)在自然界分布最广泛，毒性最强，对人类和动植物影响最大。OTA的主要产毒菌株包括赭曲霉 (Aspergillus ochraceus)、硫色曲霉 (A.sulphureus)、蜂蜜曲霉 (A.melleus)、菌核曲霉 (A.sclerotiorum)、洋葱曲霉 (A.alliaceus)、孔曲霉 (A.ostianus)和佩特曲霉 (A.ptrakii)［1-3］。

目前真菌毒素OTA的检测方法趋于采用特征性选择的真菌毒素免疫亲和柱富集和除杂，运用液相色谱法—荧光检测器进行分离测定［4］。我国于2005年规定谷类、豆类中 OTA的限量不超5 μg·kg-1［5］，其推荐检测方法［6］的最低检测限为 10 μg·kg-1，不能满足国家标准对 OTA的限量要求检测条件。作者选择免疫亲和柱-液相色谱法对全国范围内多个品种大麦的OTA污染情况进行了测定，该方法检测限为0.25 μg·kg-1，可以满足标准限量要求。通过对数据的分析反映出我国大麦真菌毒素污染情况，对我国啤酒原料选择和大麦种植储存有一定参考价值。

1 材料与方法

1.1 材料

大麦样品15份，分别取自国内4个大麦主产区的7个省 (自治区)。

仪器设备有高效液相色谱仪 (配置有紫外检测器和荧光检测器，美国 PerkinElmer公司)，ZORBAX SB-C18柱 (美国安捷伦公司)，氮气吹干仪HGC-12A(北京兴华科仪科技发展有限公司)，医用数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)，OTA Test HPLC免疫亲和柱 (美国VICAM公司)，pH酸度计 (上海精密科学仪器有限公司)，微纤维滤纸 (美国VICAM公司)。

试剂药品有甲醇、乙腈、冰醋酸 (HPLC级色谱纯，Fisher公司)，DON标准品、OTA标准品(纯度 99%，美国 SIGMA公司)，聚乙二醇(PEG)(分子量8000，美国VICAM公司)，磷酸钠、氯化钠、磷酸氢二钠、氯化钾 (分析纯，北京化工厂)，盐酸 (分析纯，天津市北方天医化学试剂厂)，磷酸二氢钾 (分析纯，天津市化学试剂三厂)。

1.2 方法

1.2.1 溶液配制

OTA标准溶液。取1.0 mg OTA标准品于容量瓶中加入甲醇定容至10mL，振摇使之充分溶解，配成浓度为100 mg·L-1的贮备液于冰箱冷藏保存备用。

PBS缓冲溶液:取 8.0 g氯化钠，1.2 g磷酸氢二钠，0.2 g磷酸二氢钾和0.2 g氯化钾，溶解到990mL的蒸馏水中，用盐酸将溶液的pH值调到7.0，最终用蒸馏水稀释至1000mL。

1.2.2 样品前处理

大麦样品约500 g，充分混合，分成2份，取其中1份粉碎 (细粉)，使粉碎样品的95%通过20目筛后用于实验，剩余样品作为留样。称取25 g磨细的样品，置于锥形瓶中，加入200mL乙腈-水(60∶40)溶液，在摇床上震荡1.5 h，取出使其至少静置10 min。提取物倒入槽纹滤纸上，滤液收集于干净的容器中，取10mL的滤液放到50mL的烧杯中，加入40mL的 PBS缓冲溶液，摇匀待用。将免疫亲和柱连接于10mL玻璃注射器下，准确移取10mL上述稀释液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴·s-1流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2～3mL空气通过柱体。然后用5mL PBS溶液以1～2滴·s-1的速度淋洗柱子1次，直至2～3mL空气通过柱体，再用5mL蒸馏水以 1～2滴·s-1的速度冲洗柱子，弃去全部流出液，并使2～3mL空气通过柱体。准确加入1.5mL甲醇洗脱，流速为1滴·s-1，收集洗脱液于玻璃试管中，用氮气吹干，然后用0.25mL流动相定容进样分析。1.2.3 色谱分析条件

色谱柱:ZORBAX SB-C18柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相:乙腈-水-乙酸 (49.5∶49.5∶1);流速:1.0mL·min-1;进样量:100 μL;检测器:荧光检测器;激发波长:331.0 nm;发射波长:464.0 nm。

2 结果与分析

大麦检测结果，谱图见图1，数据见表1。

表1 大麦样品中的OTA含量

所测样品中的OTA的含量范围为0.041～0.21 μg·kg-1，均低于我国国标限量。各个地区大麦的OTA含量平均值比较一致，都在0.1 μg·kg-1左右，新疆、黑龙江、甘肃、江苏各有一个在0.2 μg·kg-1左右的较大值，由此可见各地该年度OTA含量水平相差不大。本次试验初步分析了我国大麦的OTA的情况，数据有限，且仅选取同一年份的大麦样品，得出的结论只是一些初步的认识。后期试验可根据不同年份的气候、存储条件等有目的地选取各个品种和地区的大麦跟踪监测，以期能够找出影响我国大麦OTA含量的具体因素和影响方式。

图1 大麦OTA分析谱图

从以往的数据来看，我国也存在OTA的污染问题，1990年蔡梅等对江苏省玉米和小麦中OTA的污染情况作调查，发现小麦的污染率为3%，玉米和大米的污染率为2%，含量范围8.00～36.36 μg·kg-1，平均为 19.24 μg·kg-1［7］。OTA 作为一种天然污染物，存在于多种食品和饲料中，特别是那些处于温带地区的国家尤其严重。德国、英国、加拿大、美国和北欧各国均报道了各类粮食制品及饲料中的OTA污染情况。市售的葡萄酒、葡萄、葡萄汁、干果、咖啡豆、可可粉及其产品中，均有OTA 的检出［8-11］。

3 小结

采用免疫亲和柱-液相色谱法测定我国大麦产区的15个大麦样品，方法灵敏度高，检测限可以达到 0.25 μg·kg-1，能满足我国赭曲霉毒素 10 μg·kg-1的限量要求。

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［5］GB 2715—2005粮食卫生标准 ［S］.

［6］GB/T 5009.96—2003谷物和大豆中赭曲霉毒素A的测定［S］.

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