鲍曼不动杆菌医院感染流行病学分子研究及基因分型

冯永钦,潘红玲,龙 梅

(枝江市人民医院,湖北枝江443200)

现将本院2008-2009年所检出的220株鲍曼不动杆菌的临床分布分型及药敏结果情况报道如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源

220株鲍曼不动杆菌分离于本院2008年1月-2009年12月期间住院患者送检的标本。标本包括痰液、血液、尿液、脓液、引流液、伤口分泌物、胸水和腹水等。

1.2 试剂

氨曲南,环丙沙星,头孢吡肟,亚胺培南,头孢他啶,哌拉西林,哌拉西林/他唑巴坦,庆大霉素药敏纸片均购自OXOID公司;随机引物 5′-GTTGGTGGCT-3′,PCR扩增试剂盒及细菌基因组DNA抽提试剂盒均购自上海生工公司,引物由上海生工公司合成。

1.3 培养鉴定

所有分离菌株的培养鉴定严格按照《全国临床检验操作规程》,采用BD全自动微生物鉴定系统对所有收集的菌株进行菌种鉴定。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。

1.4 RAPD分型 采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型进行细菌同源性鉴定。

1.4.1 细菌DNA提取

用接种环挑取纯菌落接种于5 ml LB肉汤培养液,将装有LB培养液的试管置于震荡培养箱中,37℃,200 rpm/min,18-20小时培养至细菌生长对数期。然后取3 ml培养液,提取细菌基因组DNA模板置于-20℃保存备用。

1.4.2 RAPD基因分型

PCR反应体系参照上海生工公司Taq DNA Polymerase说明。PCR产物电泳分析:取5 μ L扩增产物与1 μ L 6×上样缓冲液混匀,点样于 1%琼脂糖凝胶,在120 V电压下电泳25 min,出现条带后,用凝胶成像系统观察。

2 结果

2.1 送检标本分布情况 220株鲍曼不动杆菌的分布情况是:痰液134株(61.0%)、伤口分泌物42株(19.0%)、尿液34株(15.6%)、其它临床标本占4.4%。科室分布主要为ICU,呼吸内科、烧伤科和感染科,具体见表1。

表1 铜绿假单胞菌临床分离株临床分布情况

2.2 抗菌谱分型 220株鲍曼不动杆菌抗菌谱分型分为5型,具体见表2。

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2.3 RAPD分型 对本次分离的220株鲍曼不动杆菌用RAPD分型共得216株,分型率98.2%(216/220),分为8种类型:Ⅰ-Ⅷ。其中Ⅰ型88株,Ⅱ型42株,Ⅲ型39株,Ⅳ型23株,Ⅴ型 9株,Ⅵ型8株,Ⅶ型7株和Ⅷ型4株。

3 讨论

由鲍曼不动杆菌引发的医院感染可涉及各个部位,引起呼吸道、尿道炎和菌血症等,尤其是医源性肺炎,在重症监护室常引起医院感染流行甚至暴发[1-3]。本研究结果显示,鲍曼不动杆菌最主要来源于痰标本,其次是伤口分泌物标本。

本研究调查了220株鲍曼不动杆菌临床分离株的临床分布情况,发现有52株Ⅰ型基因型而且属于E型抗菌谱型鲍曼不动杆菌分布于ICU,这表明可能存在该型基因型在本院ICU小范围的交叉感染。

RAPD技术是在聚合酶链反应基础上建立的揭示基因组多态性的分型方法,该技术的最大特点是不需要预先知道基因组序列,因而具有巨大的应用前景.现已已广泛用于细菌等微生物的基因分型,且方法简单易行、可用于分子流行病学调查,追踪传染源[4,5]。本研究结果显示,RAPD分型有8种,耐药谱分型为5种;RAPD基因型相同的其耐药谱分型大致相同,而耐药谱分型相同的RAPD分型却不一定相同,如耐药谱分型均为E型的菌株基因分型可分成Ⅰ,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ五四种型别,这表明其遗传关系有差异,说明了耐药谱分型中可被RAPD进一步分型。同时也说明,RAPD分型方法的分辨力及分型率均明显高于耐药谱分型。由于细菌的耐药性受多种遗传因子的综合影响,不稳定,耐药谱分型只能作为流行病学调查的筛选,而不宜作为可靠的调查方法,因此单用耐药谱分型是不可靠的。而RAPD分型对种和株的分辨率高,可作为鲍曼不动杆菌鉴定和分型的有效手段,可在分子水平上对鲍曼不动杆菌感染提供病原学及流行病学的研究,在早期发现和预防其交叉感染有重要意义。

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