乳腺癌组织中MCL1的表达及临床意义

朱华云， 钱志英， 徐 霞

MCL1(myeloid cell leukemia-1)属于Bcl-2家族成员之一，大量的文献研究表明MCL1参与多种细胞的存活［1-2］。近年来发现，MCL1在多种肿瘤中表达升高，并与恶性肿瘤的发生、发展及预后密切相关。其主要通过干扰信号通路的早期分子事件促使线粒体释放细胞色素C，从而维持细胞的增殖，是控制细胞凋亡的一个重要分子［3］，因此MCL1已成为针对肿瘤治疗的有效靶点之一。本研究通过检测78例乳腺癌组织中MCL1的表达水平，初步探讨MCL1与乳腺癌发生、发展的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本院乳腺外科2009年1月至2009年12月行乳腺癌手术的组织标本78例，另选取其中的40例乳腺癌组织旁的正常乳腺组织作为对照组。78例均为女性，年龄25～79岁，平均年龄50岁。其中绝经前56例，绝经后22例。所有患者术前经病理诊断证实，术后病理诊断为浸润性导管癌74例，浸润性小叶癌3例，黏液腺癌1例。临床分期(AJCC 2002年)Ⅰ期17例，Ⅱ期53例，Ⅲ期8例。所有患者手术前均未接受过放疗、化疗或其他抗肿瘤治疗。

1.2 试剂和方法 MCL1多克隆抗体购于ABCAM公司，二抗购于北京中衫生物技术有限公司。收集的全部标本均经10%中性甲醛液固定，梯度脱水、浸蜡和包埋。所取蜡块行5 μm连续切片、烘烤、脱蜡、HE染色、透明和封片。所有标本均经本院病理科两位副主任医师以上职称的病理医师诊断证实，并有完整的临床和病理资料。

应用兔抗人MCL1多克隆抗体对乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中MCL1蛋白进行免疫组化DAB法检测。实验步骤如下:(1)石蜡片常规脱蜡。二甲苯洗涤后，分别用100%、95% 、85%乙醇、自来水及蒸馏水按梯度脱水。(2)阻断内源性过氧化物酶。3%双氧水孵育10 min。(3)抗原修复。利用微波修复抗原10 min。(4)封闭。滴加非免疫血清，室温孵育1.5 h。(5)加一抗工作液。加入1∶100兔抗人MCL1多克隆抗体4℃过夜。(6)加二抗工作液。加入生物素标记的二抗工作液，37℃孵育30 min。(7)DAB染色。(8)苏木素复染。(9)封片。(10)镜下观察。

1.3 结果判断 细胞质或细胞核上存在棕黄色颗粒判为阳性细胞，选背景清晰、阳性表达效果好的切片作统计学分析。每张切片随机选择5～10个高倍视野，计数1 000个细胞中的阳性细胞，取其平均数计算阳性细胞表达率。

1.4 统计学方法 所有数据应用SPSS 11.0统计软件进行统计分析，两样本均数比较用t检验，方差不齐时采用t'检验，多个样本均数的资料采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MCL1蛋白在乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中的表达 MCL1在乳腺癌旁正常乳腺组织中几乎不表达(图A)，但是在乳腺癌腺上皮细胞中呈高表达(图B)，MCL1平均阳性细胞表达率为49.11%，同时表达存在异质性。两组MCL1阳性细胞表达率存在明显区别，差异有统计学意义(P＜0.001)，提示乳腺癌组织存在MCL1异常高表达现象。此外，MCL1在肿瘤组织中的表达也存在异质性，在分化差的肿瘤组织中MCL1表达水平更高。

图B MCL1在乳腺癌组织中的表达 ×200

2.2 MCL1蛋白表达与乳腺癌临床病理因素的关系 由表1可见，临床病理Ⅲ期组织中MCL1表达明显高于Ⅰ期和Ⅱ期(P＜0.05)，伴有淋巴结转移的肿瘤组织中MCL1表达明显高于未转移者(P＜0.05)，而MCL1蛋白的表达与患者年龄、肿瘤大小、是否绝经均无关。

3 讨论

乳腺癌是最常见的女性恶性肿瘤之一，近年来其发病率呈上升趋势。研究乳腺癌的病理机制不仅可为其预后判定提供独立的新指标，也为临床治疗提供新的手段。

已知细胞凋亡过程中的调控环节异常可使DNA受损，干扰其程序性凋亡，致使细胞无限制生长，导致肿瘤的发生、发展［4］。以往的研究表明Bcl-2基因是细胞凋亡过程中线粒体途径的主要调控因子，其表达与乳腺癌临床生物学行为密切相关，可以作为判断乳腺癌预后的指标［5］。MCL1属于Bcl-2家族蛋白，但是和Bcl-2不同的是，MCL1在细胞内更容易被诱导［6］，且半衰期更短［7］。此外，MCL1 在细胞内的表达更为广泛，除了在线粒体膜上有表达，在细胞核和细胞浆中均有表达［8］。近年来人们逐渐关注MCL1蛋白在肿瘤发生发展中的作用，研究结果提示MCL1在多种实体瘤中均发挥着重要的作用。MCL1表达上调提示肿瘤的发生，超过85%的转MCL1基因小鼠在2年内发生了B细胞淋巴瘤［9］;MCL1高表达还与胃癌发生有关，可作为胃癌早期预警的重要指标［10-11］。而且，MCL1表达下调能够促进肿瘤细胞凋亡，表明其可能成为一些恶性肿瘤的潜在治疗靶标。

表1 MCL1蛋白与乳腺癌临床病理因素的关系

尽管目前已有较多研究显示MCL1在很多肿瘤中呈高表达，但是在乳腺癌中的作用尚未见报道。本研究采用免疫组化技术检测78例乳腺癌及40例癌旁正常乳腺组织中MCL1蛋白的表达水平，探讨MCL1蛋白与乳腺癌的临床病理关系，发现MCL1蛋白在有淋巴结转移者中的表达高于无淋巴结转移者，且与乳腺癌的分化程度有关，提示MCL1基因可作为乳腺癌治疗的有效靶点。

综上所述，MCL1蛋白的高表达与乳腺癌的发生、发展密切相关，为研究乳腺癌的发病机制及治疗手段提供了一个新思路。

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