真菌对 UF-1000i全自动尿沉渣分析仪白细胞检测的影响

莫 筠，陈玉莲，谭洪扬，黄碧红

(台山巿人民医院，广东台山 529200)

全自动尿沉渣分析仪因其操作简便、快捷、重复性好等优点，在临床检验上广泛应用。但在实际工作发现，真菌可影响全自动尿沉渣分析仪对尿中白细胞的检测。2010年 1～12月，我们对此问题进行了研究。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 Sysmex-UF-1000i全自动尿沉渣分析仪及其配套试剂(日本 Sysmex公司生产，含其质控和校正试剂，校正及每日质控在有效范围内);CH-20双目显微镜(日本 Olympus公司);改良牛鲍计数板。

1.2 方法

1.2.1 底液及各母液的制备 选择 pH 5.5～7.0、尿液密度 1.010～1.025 kg/L，其余尿十项检查均为阴性的尿标本，用 4 000 r/min离心 10 min，取上清液作为底液 A。取 3份同血型正常血常规标本各 1 ml混合，用生理盐水离心洗涤 3次，3 000 r/min离心 3 min，去其上清，作为红细胞母液BR。取 2份化脓性脑膜炎患者新鲜脑脊液标本，用生理盐水进行离心，1 500 r/min离心 2 min，去上清，作为白细胞母液 BW。取白色念珠菌 ATCC90028作为标准菌株，经培养后，取 10个以上菌落，用生理盐水洗涤 3次，3 000 r/min离心 3 min去上清，作为真菌母液BY。

1.2.2 实验分组及检测指标 将上述 3种母液用底液 A重悬，使用牛鲍计数板进行充池计数 5次，调整其中各成分，使 3种纯母液中各自成分浓度接近 4 000个 /μl，分别记为 BR、BW、BY。将实验组分为白细胞—红细胞(WBC-RBC)混合尿组、白细胞—红细胞—真菌(WBC-RBC-YLC)混合尿组。按实验设计用不同量的底液 A和不同量的 BR、BW、BY进行混合，使上述各组中 WBC、RBC、白色念珠菌含量理论值接近 50/μl、100/μl、200/μl、500/μl、1 000/μl、2 000/μl(WBC-RBC-YLC混合组为 1 333/μl)，总量为 5 ml。将各组中不同浓度的实验标本轻轻混匀，用 UF-1000i对每份标本进行 5次平行检测，记录其 WBC、RBC、YLC(酵母样菌 )、细菌 (BACT)检测结果。整个实验在 3 h内完成。

1.3 统计学方法 采用 SPSS11.0统计软件，结果以±s表示，两样本的比较采用t检验，多个样本均数比较用方差分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 WBC-RBC混合尿各有形成分的检测 UF-1000i对无真菌的 WBC-RBC混合尿中各细胞计数准确可靠，仪器无报警提示，出现 BACT不排除是上述 WBC母液中含有所致。结果见表1。

2.2 WBC-RBC-YLC混合尿的检测 当混合尿中各成分浓度较低时，真菌主要对 RBC计数有干扰，在理论值≥500个/μl浓度组中，YLC对 WBC计数有干扰，使 WBC计数假性升高，且在理论值1 000个 /μl和 1 333个 /μl(因各成分母液为 4 000个/μl，三者混合时最高浓度为 1 333个 /μl)两组中，均出现真菌计数为 0个/μl。结果见表2。

表1 WBC-RBC混合尿中各成分比较(个 /μl，±s)

表1 WBC-RBC混合尿中各成分比较(个 /μl，±s)

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表2 WBC-RBC-YLC混合尿标本检测结果(个 /μl，±s)

表2 WBC-RBC-YLC混合尿标本检测结果(个 /μl，±s)

理论值 WBC RBC YLC BACT 50 44.45±1.18 83.30±3.25 20.88±1.55 18.34±3.52 100 92.60±2.39 152.72±4.64 42.72±4.74 35.64±4.82 200 180.62±7.05 312.28±10.08 64.34± 3.37 52.64±8.65 500 528.70±5.38 743.38±15.98 154.48±11.24 121.02±10.88 1 000 1 054.36±15.64 1 470.18±20.82 0 227.32±18.56 1 333 1 336.46±19.60 1 835.34±29.02 0 269.65±20.45

3 讨论

UF-1000i全自动尿沉渣分析仪利用流式细胞和电阻抗分析的原理，对尿中各有形成分进行荧光染色后，检测其荧光强度信号，从而区分各有形成分并计数[1]。但尿中有形成分复杂多变，不同成分可有相似之处，故其计数可受干扰。真菌，特别是酵母样菌，其体积大小和红细胞相似，红细胞无细胞核和线粒体呈低荧光强度，而真菌具有高荧光强度的RNA和 DNA，但散射光强度与红、白细胞相似，故其散点分布在红、白细胞之间的区域，常和红细胞散点有交叉重叠。

本研究结果发现，真菌对白细胞计数的干扰可分为 2方面:①当尿液中只含有真菌时，仪器可将真菌误计为“白细胞”和“红细胞”，不同浓度的纯真菌尿均可出现此现象，甚至将真菌误计为“0个 /μl”，造成真菌的假阴性和白细胞的假阳性出现。仪器的分类、计数明显与标本中的成分不符。②当真菌尿液标本中同时含有白细胞或红、白细胞，在白、红细胞≤200个 /μl，即白细胞浓度较低时，仪器对白细胞的识别和计数准确无误，而且不随着真菌浓度的升高而出现白细胞计数的假性升高，仪器此时主要是在对红细胞的计数出现错误。当白细胞和真菌的浓度≥500个/μl，即白细胞浓度较高时，真菌对混合尿中白细胞计数有干扰，造成其假性升高，故尿中有形成分组成和浓度对白细胞造成的干扰是不同的。

无论是纯真菌尿或含红、白细胞的真菌混合尿，均可出现对真菌计数为 0个/μl，而只计数为“红细胞”和“白细胞”的情况，且可随着尿中成分浓度的升高出现次数增加，造成真菌计数的假阴性，这可能与仪器在检测时真菌的荧光染色失败或超出仪器的检测范围有关，确切原因有待进一步探讨。

本实验不采用静脉血中的白细胞制备母液，是因为静脉血经离心后取得的白细胞层中往往含多少不等的红细胞和大量的血小板，且经离心后尚具活性的白细胞相互黏附成团，经显微镜检查，只有少数白细胞是单个存在，且其中大量的血小板也极可能对尿沉渣的检测造成干扰。脓尿中虽然有大量的白细胞，但通常同时有大量的细菌存在，为避免其对红细胞或白细胞造成干扰，本实验取化脓性脑膜炎患者新鲜脑脊液，镜检细胞以中性粒细胞为主，偶见革兰阴性双球菌，故经低速离心洗涤，制备白细胞母液。虽然表1中细菌的计数与白细胞计数呈正的直线相关，但其数量极低，对仪器检测红、白细胞无影响[2，3]。

综上所述，对 UF-1000i尿沉渣分析仪的检测结果，应从其有形成分的测量值和散点图、直方图是否相对应来综合判断其结果的可靠性。虽然UF-1000i提供白细胞相关检测参数不多，但当仪器出现报警提示，或虽无报警提示但散点图上特定位置出现异常散点时，都要对标本进行人工镜检复查，确保尿沉渣结果的准确性，避免对临床的诊治工作造成干扰。

[1]熊立凡，李树仁.临床检验基础[M].3版.北京:人民卫生出版社，2005:191-193.

[2]黄松音，黄雪琼，谢文锋，等.菌尿对两种全自动尿沉渣分析仪检测尿红细胞的影响[J].检验医学与临床，2010，7(14):1440-1444.

[3]陈忠，邹晓月，袁立新.UF-100尿沉渣分析仪和干化学检测尿中红细胞和白细胞及管型的干扰因素分析[J].中国实验诊断学，2008，12(4):534-537.