RP-HPLC法同时测定复方间苯二酚洗剂中间苯二酚和苯酚的含量

崔 丽（南京市红十字医院药剂科，南京市 210001）

复方间苯二酚洗剂是《中国医院制剂规范》第2版中收载的皮肤科外用制剂，具有杀霉菌作用，临床上用于治疗霉菌性皮肤病，如手足癣、体癣、股癣等。本制剂中间苯二酚、苯酚含量测定的方法有二阶导数紫外光谱法[1]、双波长线性回归光度法[2]、系数倍率法[3]和《中国医院制剂规范》中规定采用的溴量法[4]。采用上述方法测定时，操作烦琐，不能达到快速检验的目的，且溴量法只能测定2组分的总量，不能测定2组分各自的量。为更好地控制该制剂的质量，保证临床用药安全，笔者建立反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，以同时测定制剂中间苯二酚和苯酚的含量。结果表明，所建立的方法简便、快速、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

LC-20AT HPLC仪、SPD-20A紫外检测器（日本岛津公司）；BS 210s电子天平（北京赛多利斯有限公司）。

复方间苯二酚洗剂（自制，批号：100402、100511、100604，规格：每瓶100 mL，其中间苯二酚含量：100 mg·mL－1，苯酚含量：37.49 mg·mL－1）；间苯二酚、苯酚标准品（中国药品生物制品检定所，批号：100509-200401、100106-200303，供含量测定用）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Hedera ODS-2（250 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：甲醇-水（65∶35）；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱温：25 ℃ ；进样量：20 µL；灵敏度：0.02AUFS。

取“2.2”项下混合标准品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20µL进样，记录色谱，结果见图1。

图1 高效液相色谱图A.混合标准品；B.供试品；C.阴性对照；1.间苯二酚；2.苯酚Fig 1 HPLC chromatogramsA.mixed standard substance；B.test sample；C.negative control；1.resorcinol；2.phenol

图1结果表明，阴性对照样品对测定无干扰。

取“2.2.2”项下混合标准品溶液20µL，按选定的色谱条件重复进样5次，色谱参数结果见表1。

表1 色谱参数结果Tab 1 Results of chromatographic parameter

由表1可见，各参数均符合要求。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液。精密量取1 mL样品，置于100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取稀释液1 mL，置于10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.2 标准品溶液。分别精密称取间苯二酚、苯酚标准品10、3.75 mg，同置于100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成每1 mL中含间苯二酚0.1 mg、苯酚0.0375 mg的混合标准品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液。按处方比例制备不含间苯二酚、苯酚的阴性样品，按“2.2.1”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察

（1）间苯二酚：精密称取间苯二酚标准品50 mg，置于100 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，制成每1 mL含间苯二酚0.5 mg的贮备液。精密量取该液1.0、2.5、5.0、10、20 mL，分别置于50 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀。每份进样3次，在上述色谱条件下分析。以峰面积（Y）与其对应的质量浓度（X）进行回归分析，得回归方程：Y＝18650X－3213.6（r＝0.9999），即间苯二酚检测浓度线性范围为10～200 µg·mL－1。

（2）苯酚：精密称取苯酚标准品100 mg，置于100 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，制成每1 mL含苯酚1 mg的贮备液。精密量取该液1.0、2.5、5.0、10、20 mL，分别置于100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀。每份进样3次，在上述色谱条件下分析。以峰面积（Y）与质量浓度（X）进行回归分析，得回归方程：Y＝19863X－16178（r＝0.9999），即苯酚的检测浓度线性范围为10～200µg·mL－1。

2.4 重复性试验

取同一批号（100402）样品6份，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，进样测定。结果，间苯二酚标示量为100.1%（RSD＝0.78%）、苯酚标示量为101.0%（RSD＝0.56%）。

2.5 稳定性试验

取“2.4”项下的溶液在室温放置1、2、3、4、5、6 h时测定峰面积，计算RSD。结果，间苯二酚平均峰面积1712468，RSD＝0.31%（n＝6），苯酚平均峰面积852097，RSD＝0.45%（n＝6），表明供试品溶液在6 h内稳定。

2.6 回收率试验

采用加样回收率试验方法。精密量取已知含量的样品（间苯二酚0.1 mg·mL－1、苯酚0.0375 mg·mL－1）2.5 mL，各6份，置于50 mL容量瓶中，分别精密加入“2.3”项下间苯二酚贮备液2.5、5.0、10 mL和苯酚贮备液1.25、2.5、5 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，测定峰面积。回收率试验结果见表2。

表2 回收率试验结果Tab 2 Results of recovery tests

2.7 样品含量测定

取样品3批，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，分别取供试品溶液及“2.2.2”项下的混合标准品溶液各20µL，进样测定，用外标法计算含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果（n＝3）Tab 3 Results of content determination of samples（n＝3）

3 讨论

在200～400 nm波长范围内对间苯二酚、苯酚标准品进行紫外光谱扫描，结果，间苯二酚在274 nm波长处具有最大吸收峰，苯酚在270 nm波长处具有最大吸收峰，两者最大吸收波长相差4 nm，绝大部分吸收光谱都重叠在一起，相互干扰无法进行定量分析。因此，本文采用RP-HPLC法，选择甲醇-水系统作为流动相，并考察了该系统中甲醇不同加入量对间苯二酚和苯酚保留时间和色谱分离的影响。结果显示，甲醇比例增大，被测组分保留时间随之缩短。为保证间苯二酚和苯酚完全分离，同时又尽量缩短一次进样的分析时间，达到同时测定的目的，最后确定流动相最佳配比为甲醇-水（65∶35）。

由于本制剂中的主药成分间苯二酚、苯酚在光照条件下不稳定，易氧化成醌类而影响测定，故该制剂的含量测定应在避光条件下进行，比如用黑纸包裹容量瓶测定，这样待测溶液稳定性会更好。

[1]熊国营.二阶导数紫外光谱法测定复方间苯二酚洗剂中苯酚及间苯二酚的含量[J].中国中医药现代远程教育，2008，11（6）：1333.

[2]张 群，占 峰，开小明.双波长线性回归光度法同时测定苯酚和间苯二酚[J].光谱学与光谱分析，2006，26（11）：2110.

[3]洪慧丰，李安华.系数倍率法测定复方间苯二酚涂剂中二组分的含量[J].中国现代应用药学杂志，2003，20（1）：63.

[4]卫生部药政局.中国医院制剂规范[S].第2版.北京：中国医药科技出版社，1995：100.