抑癌基因RUNX3在胃癌中的表达及临床意义

程智勇，韩 猛，门晓彦，易喜贤

（1.河北省秦皇岛市第一医院普外一科，河北秦皇岛 066000；2.河北省秦皇岛市海港医院内分泌科，河北秦皇岛 066000）

抑癌基因RUNX3在胃癌中的表达及临床意义

程智勇1，韩 猛1，门晓彦2，易喜贤1

（1.河北省秦皇岛市第一医院普外一科，河北秦皇岛 066000；2.河北省秦皇岛市海港医院内分泌科，河北秦皇岛 066000）

目的探讨胃癌组织中RUNX3基因表达与胃癌临床病理的关系及其对预后的判断价值。方法应用免疫组织化学SP技术和图像分析技术，研究RUNX3在胃癌和正常胃黏膜组织中的表达情况及阳性表达面积、强阳性表达面积，分析与病理参数的关系，并采用Kap1an-Meier生存曲线分析不同表达水平对术后生存率的影响。结果发现胃癌组织RUNX3表达阳性率、阳性面积、强阳性面积均明显低于正常胃黏膜组织（P＜0.01）。胃癌组织RUNX3表达与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴转移、肿瘤分期明显正相关（r=0.86，P＜0.05），术后3、5年生存率低表达者明显低于高表达者（P均＜0.05）。结论RUNX3基因表达低下或丢失与胃癌发生、浸润、转移有关，可作为预测胃癌患者术后生存率的指标。

胃肿瘤；基因表达；免疫组织化学

胃癌的发生是一个多因素、多步骤的复杂过程，遗传因素也在其中扮演着重要角色。新近研究发现［1］，人类runt相关转录因子基因3（runtre1ated transcription factor gene 3，RUNX3）可能也是一种抑癌基因，且在人类正常组织器官的形成以及在某些组织的癌变过程中可能起着重要作用。2010年5月—2011年1月，我们采用免疫组织化学技术结合图像定量分析RUNX3在胃癌不同临床病理参数下的表达差异及对预后判断的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料：胃癌组82例，为本院外科手术后随访生存超过5年的胃癌患者手术切除标本，病理检查诊断明确。肿瘤大小、部位、大体类型及浆膜受侵状态、摘除之淋巴结分组均根据手术记录。胃癌组患者中，男性60例，女性22例，年龄30～78岁，中位年龄56岁。依据国际抗癌联盟分级标准，Ⅰ、Ⅱ期胃癌59例，Ⅲ、Ⅳ期23例。对照组30例，同期经胃镜及病理诊断的正常胃黏膜组织。男性18例，女性12例，年龄32～74岁，平均52岁。

1.2 主要试剂与仪器：鼠抗人RUNX3单克隆抗体（Anti-dobi Diagnisica，Inc，USA，购自美国Santq Gruz公司），SP免疫组织化学试剂盒购自迈新公司。Axiop1an 2 imaging显微图像分析系统（ZEISS，Germany）。

1.3 免疫组织化学染色：标本甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片，采用免疫组织化学SP技术检测标本中RUNX3表达，高温、高压修复抗原。每批实验均设有阴性、阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，已知阴性切片做阳性对照。RUNX3表达以胃腺上皮细胞或癌细胞胞浆中出现明显的黄色、棕黄色或黄褐色颗粒为阳性细胞。

1.4 图像分析：所有切片图像经Axiop1an 2多功能全自动荧光显微镜和AxioCan数码相机真彩输入，画面130万像素。图像经增强、分割和二值化处理，通过KS400图像分析系统（Ver，3.0）对图像识别及图像分析处理以选取测量参数自动测量和分析，数据转换到Exce1进一步分析处理。经上述处理后，得到阳性表达面积和强阳性表达面积。

1.5 统计学方法：应用SPSS 12.0软件进行分析，计量数据以±s表示，组间比较采用t检验和χ2检验，术后生存率采用Kap1an-Meier生存曲线分析，同时采用Log-rank检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 RUNX3表达阳性率：胃癌组RUNX3表达阳性率为41.5%（34/82），显著低于对照组的100.0%（30/30）（P＜0.01）。胃癌中RUNX3表达的阳性面积、强阳性面积分别为（5 028.41±150.22）μm2、（1 724.85±50.22）μm2，对照组分别为（13 824.08 ±352.61）μm2、（6 868.72±201.84）μm2，胃癌组均明显低于对照组（P＜0.01）。

2.2 胃癌组织RUNX3表达与临床病理参数关系：肿瘤分化程度、浸润深度以及浆肌层淋巴结转移等，差异均有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 胃癌组织RUNX3表达与临床病理参数关系Table 1 Correlation between the expression of RUNX3 in gastric carcinoma tissue and related clinicopathological parameters（±s，A/μm2）

表1 胃癌组织RUNX3表达与临床病理参数关系Table 1 Correlation between the expression of RUNX3 in gastric carcinoma tissue and related clinicopathological parameters（±s，A/μm2）

*P＜0.01 vs same itemsby t test

C1inicopatho1ogica1 parameters n Positive expression area Strong positive expression area Gender Ma1e 60 6 724.44±232.31 2 243.16±157.42 Fema1e 22 6 083.57±203.26 2 017.55±100.11 Age≤50 years o1d 23 6 843.65±223.64 2 354.42±108.18＞50 years o1d 59 5 987.80±211.85 1 743.80±98.22 Tumor diameter≤3.0cm 45 5 984.21±241.24 3 043.24±150.22＞3.0cm 37 5 812.79±151.15 2 998.48±100.12 Differentiation 1eve1*High and moderate 35 7 550.28±283.45 3 001.51±150.11 Low 47 3 164.84±162.84 9 23.84±105.26 Infi1trating depth*Mucosa/submucosa 21 8 424.64±185.69 4 228.62±174.65 Muscu1ar 1ayer/serosa 61 3 226.23±166.15 945.81±100.12 Lymph nodemetastasis*No 55 9 984.04±392.44 3 024.14±118.11 Yes 27 3 122.12±116.14 926.43±99.45 Tumor stage*Ⅰ/Ⅱ59 9 642.84±211.15 3 083.16±150.21Ⅲ/Ⅳ23 1 521.54±135.45 948.88±25.66

2.3 RUNX3表达与预后的关系：若以胃癌组织RUNX3表达阳性面积＞7 000μm2或强阳性面积＞3 000μm2为高表达，阳性面积＜4 000μm2或强阳性面积＜1 000μm2为低表达，Kap1an-Meier生存曲线分析显示，RUNX3高表达者术后累计生存率显著高于低表达者（P＜0.05）。高表达者术后3、5年生存率分别为80.6%（29/36）与58.3%（21/36），显著高于低表达者56.5%（26/46）与34.7%（16/ 46）（P＜0.05）。

3 讨 论

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，占男性第2位，女性第3位，其病死率为恶性肿瘤之首［2-3］。胃癌的患病率存在着明显的地区差异，在全球范围内，以亚洲的日本、韩国和中国为最高［4］。尽管近年来世界胃癌的患病率和病死率有下降的趋势，但每年的新发病例约有35%发生在中国［5］；目前仍是我国患病率和病死率最高的恶性肿瘤之一［6-7］。人类RUNX3基因位于染色体1p36.1，全长约67 kb；RUNX3蛋白是由α亚单位和β亚单位构成的含415个氨基酸残基的异二聚体。有研究显示［1］，RUNX3可能与胃黏膜上皮肿瘤的形成具相关性。也有研究认为［8］，RUNX3在胃癌中表达的下调或缺失可能与其启动子的高度甲基化有关；敲除小鼠的RUNX3基因后，其胃黏膜上皮细胞可出现增生肥大。本研究发现，胃癌组织中无论从RUNX3的阳性表达面积或强阳性表达面积，均与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及肿瘤分期显著相关，但与患者性别、年龄、肿瘤大小无明显相关。本研究胃癌组织中RUNX3阳性表达率显著低于正常胃组织，说明RUNX3调控能力下降，从而导致胃癌的发生、发展。

研究还发现，胃癌组织中RUNX3表达程度显著影响患者术后生存期，Kap1an-Meier生存曲线分析显示，胃癌组织中RUNX3高表达者术后累计生存率显著高于低表达者，RUNX3高表达者术后3、5年生存率均显著高于低表达者。可见，检测胃癌组织中RUNX3表达水平，有利于预测患者预后。以往胃癌基因表达均采用免疫组织化学染色后计算表达阳性百分率，数据只能进行半定量分析，其本质是定性研究。本研究试图采用图像定量分析法［6］，将所有切片均经Axiop1an 2多功能全自动荧光显微镜，通过KS400图像分析系统得到阳性表达面积和强阳性表达面积，然后进行定量统计分析，数据不但能反映是否有阳性表达，而且可通过阳性面积和强阳性面积反映RUNX3表达的强弱。综上所述，RUNX3基因可能在胃癌的发生、发展及转移中起重要作用，今后通过进一步研究导致其表达下调的具体机制，可能有助于揭示胃癌发生、发展本质。

［1］ITO K，LIU Q，SALTO-TELLEZM，et a1.RUNX3，a nove1 tumor suppressor，is frequent1y inactivated in gastric cancer by protein mis1oca1ization［J］.Cancer Res，2005，65（17）：7743-7750.

［2］CREW KD，NEUGUT AI.Epidemio1ogy of gastric cancer［J］. Wor1d JGastroentero1，2006，12（3）：354-362.

［3］ALBERTS SR，CERVANTES A，VAN DE VELDE CJ.Gastric cancer：epidemio1ogy，patho1ogy and treatment［J］.Ann Onco1，2003，14（Supp12）：31-36.

［4］ELLEY JR，DUGGAN JM.Gastric cancer epidemio1ogy and risk factors［J］.JC1in Epidemio1，2003，56（1）：1-9.

［5］SETIAWAN VW，ZHANG ZF，YU GP，et a1.GSTT1 and GSTM1 nu11genotypes and the risk of gastric cancer：A case-contro1 study in a Chinese popu1ation［J］.Cancer Epidemio1 Biomarkers Prev，2000，9（1）：73-80.

［6］NUIWX，QIN XY，LIU H，et a1.C1inicopatho1ogica1 ana1ysis of patients with gastric cancer in 1200 cases［J］.Wor1d J Gastroentero1，2001，7（2）：281-284.

［7］YIN T，JIXL，SHENMS.Re1ationship between 1ymph node sinuses with b1ood and 1ymphatic metastasis of gastric cancer［J］.Wor1d J Gastroentero1，2003，9（2）：207-216.

［8］OTTO F，LUBBERTM，STOCK M.Upstream and downstream targets of RUNX proteins［J］.JCe11Biochem，2003，89（1）：9-18.

（本文编辑：赵丽洁）

EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF ANTI-ONCOGENE RUNX3 IN GASTRIC CARCINOMA

CHENG Zhiyong1，HAN Meng1，MEN Xiaoyan2，YIXixian1
（1.The Frist Departmentof Greneral Surgery，the First Hospital of Qinhuangdao City，Hebei Province，Qinhuangdao 066000，China；2.Departmentof Endocrinology，the Haigang Hospital of Qinhuangdao City，Hebei Province，Qinhuangdao 066000，China）

ObjectiveTo study the expression of anti-oncogene runt-re1ated transcription factor gene 3（RUNX3）and its c1inica1 significance in gastric carcinoma patho1ogy and prognosis.MethodsSP immunohistochemistry and image ana1ysis were used for studying the gene expression，positive expression area and strong positive expression area of RUNX3 in gastric carcinoma tissue and norma1gastric mucosa tissue.The inf1uence of different expression 1eve1s on postoperative surviva1 rates was ana1yzed with Kap1an-Meier surviva1curves.ResultsPositive percentage，positive expression area and strong positive expression area of RUNX3 expression in gastric carcinoma tissue were much higher than those in norma1gastric mucosa tissue（P＜0.01）.Expression of RUNX3 in gastric carcinoma tissue was re1ated to differentiation degree，infi1tration depth，1ymphatic metastasis and tumor stage in gastric carcinoma tissue obvious1y.As for postoperative surviva1 rates for 3 and 5 years，itwas obvious1y that the hypo-expresserswere 1ower than hyper-expressers.ConclusionDecreased or 1ost expression of antioncogene RUNX3 corre1ateswith occurrence，infi1tration and metastasis of gastric carcinoma，and it can be used as a prognosis indication for postoperative surviva1 rates.

stomach neop1asms；gene expression；immunohistochemistry

R735.2

A

1007-3205（2011）10-1135-03

2011-07-04；

2011-08-25

程智勇（1977-），男，河北秦皇岛人，河北省秦皇岛市第一医院主治医师，医学硕士，从事普外科疾病诊治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2011.10.007