慢性乙型病毒性肝炎患者血清细胞因子与超敏 C反应蛋白水平分析

顾华爱,汪月祥,李丽敏

乙型病毒性肝炎 (乙肝)是一种严重危害人类身心健康的传染性疾病,乙肝病毒寄生于人肝细胞中,病程通常慢性化,长期可致肝纤维化、肝硬化以至肝癌[1]。其发病机制非常复杂,至今尚未完全明了。国内外相关研究认为乙肝患者肝功能的损害并非由乙型肝炎病毒(HBV)直接损害肝细胞所致,肝功能损害的发生和发展与患者的细胞免疫功能密切相关[2-4]。本研究采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定了慢性乙肝患者血清中白介素 (IL)-2、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)3种与细胞免疫功能十分密切的细胞因子,以及急性时相蛋白质——超敏 C反应蛋白 (high-sensitivity C,hs-CRP)的表达水平,并以健康人作为对照,旨在探讨 3种细胞因子及 hs-CRP在慢性乙肝患者体内的表达水平与乙肝患者肝功能损害之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2010年 3—9月来我院就诊的临床确诊的慢性乙肝患者 75例,年龄 29～53岁,平均 (38.5±9.7)岁;男 61例,女 14例;均符合 2000年第十次全国病毒性肝炎与肝病学术会议修订的 《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准。并选取同期 50例参加健康体检的成年人作为对照组,年龄 30～55岁,平均(40.3±8.3)岁;男 35例,女 15例;均经体检排除乙肝及其他疾病。

1.2 方法 利用真空采血管采集受试者空腹肘静脉血共 5 ml于无抗凝剂玻璃试管中,37℃水浴 20 min,以 4 000 r/min离心5 min(离心半径70 mm),分离血清于 3个管中。前 2个管用于常规肝功能[丙氨酸氨基转氨酶 (ALT)和天冬氨酸氨基转移酶 (AST)]检查、hs-CRP和乙肝两对半免疫学检查,第 3个管置 -20℃中保存,批量测定 IL-2、IL-6和TNF-α。

1.3 仪器及试剂盒 ALT、AST及 hs-CRP测定试剂盒为宁波亚太生物技术有限责任公司生产;乙肝两对半 ELISA测定试剂盒为上海科华生物技术有限公司生产;IL-2、IL-6、TNF-αELISA测定试剂盒为美国 Rapidbio(RB)公司生产;肝功能及 hs-CRP均在 BECKMAN COULTER Synchron CX5全自动生化仪上进行测定,免疫学指标由熟练检验技师在 DEM酶标洗板机上洗板,ST-360酶标仪上进行测定,各实验操作严格按试剂配套说明书进行。

1.4 统计学方法 采用 SPSS 13.0软件包进行数据分析。计量资料以 (x ±s)表示,计量数据组间比较采用 t检验。p＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料及肝功能比较 慢性乙肝组患者血清 ALT、AST水平分别为(521.4±105.3)U/L和 (321.6±73.5)U/L,对照组分别为 (28.5±10.9)U/L和 (17.8±15.3)U/L,两组 ALT、AST水平比较差异均有统计学意义 (t值分别为 35.3和 18.5,p＜0.01)。

2.2 细胞因子及 hs-CRP水平比较 慢性乙肝组患者血清 IL-2表达水平较对照组显著降低,而血清 IL-6、TNF-α、hs-CRP水平则较对照组显著升高,差异均有统计学意义 (p＜0.05,见表 1)。

3 讨论

基础研究表明,HBV感染人体后,人体对于 HBV既可以产生细胞免疫应答,又可以产生体液免疫应答,但是以细胞免疫应答为主。其中效应 T细胞及 Th细胞在免疫应答过程中可以释放多种细胞因子,在体内构成免疫调节网络,作用于病毒感染的靶肝细胞,引起肝细胞组织的免疫病理损伤。为了研究慢性乙肝患者细胞免疫应答过程中产生的细胞因子与肝功能损害之间的关系,本研究测定了慢性乙肝患者肝功能损害指标 ALT、AST,急性时相蛋白 hs-CRP以及血清中的 3种细胞因子 IL-2、IL-6、TNF-α。

众所周知,IL-2、 IL-6、TNF-α均为体内重要的细胞因子,具有多种生物学功能。IL-2主要由细胞产生,IL-6可由多种活性细胞 (如 B细胞、单核/巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞)分泌。HBV感染机体后所形成的免疫复合物均可刺激单核巨噬细胞,促使其分泌IL-6。在肝内,IL-6可以调节许多急性期反应蛋白如 hs-CRP的合成[5];而TNF-α也能刺激 T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞等,并使其功能活性增强,并与抗原及病毒感染后改变了的肝细胞膜成分发生反应,造成肝细胞损伤。因此,当肝脏感染 HBV后受到不同程度损伤时,可以引起 CD4+T细胞数量下降,从而可以引起 IL-2血清表达降低[6];同时由于肝细胞对细胞因子 IL-6、TNF-α的清除能力下降,使体内细胞因子通过血液运输到机体各部,导致 IL-6、TNF-α水平升高;hs-CRP是一种主要由肝脏合成的急性时相蛋白,因此当肝脏细胞被HBV病毒感染后,造成肝细胞的损害从而引起 hs-CRP的表达增加。故不论何种原因导致的肝细胞损害都可以使肝细胞膜破损,从而使得 ALT、AST释放入血引起血清水平升高。

表 1 两组 3种细胞因子及 hs-CRP水平比较 Table 1 The levels of cytokines and hs-CRP in the two groups

表 1 两组 3种细胞因子及 hs-CRP水平比较 Table 1 The levels of cytokines and hs-CRP in the two groups

组别 例数 IL-2(ng/L) IL-6(ng/L)TNF-α(ng/L)hs-CRP(mg/L)慢性乙肝组 75 34.0± 6.8 103.5±69.8 108.5±59.0 10.45±4.27对照组 50 87.7±65.7 16.4±9.9 38.8±19.5 1.58±0.75 t值.3 P值 0.023 0.004 0.007 0.008-15.8 35.2 20.7 25

本研究结果显示,慢性乙肝患者血清IL-2表达较健康者显著降低,其原因可能是由于患者感染 HBV后,引起分泌 IL-2的T细胞数量下降造成的。而IL-6、TNF-α及急性时相蛋白 hs-CRP血清表达则较健康者显著增加,与国内外有关报道相符合[7-10]。并且乙肝患者肝功能损害重要指标 ALT、AST水平也较健康者显著升高,与上述基础理论研究相符合。因此,可以认为血清 IL-2的低表达以及 IL-6、TNF-α的高表达可能与乙肝患者肝功能的损害存在一定的关联。动态监测慢性乙肝患者血清 IL-2、IL-6、TNF-α及 hs-CRP表达,对于临床医生了解患者机体免疫应答状况、判断肝功能的损伤情况以及患者的疗效与预后都有重要的临床意义。

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