高效液相色谱技术在千柏鼻炎片中大黄酚含量测定中的应用

周长征

(山东中医药大学药学院，济南250355)

千柏鼻炎片是由千里光、卷柏、决明子等7味中药制备的复方制剂，收载于2005版药典一部，但质量标准中没有该药含量测定项目，2010版药典中亦没有其含量测定结果。2010年9～11月，我们采用高效液相色谱技术测定了其主要成分决明子中大黄酚的含量，现报告如下。

材料:大黄酚对照品购自中国药品生物制品检定所;千柏鼻炎片由济南康众医药科技开发有限公司提供(批号:20090907);甲醇为色谱纯(天津市由科密欧化学试剂开发公司);水为双蒸水;其它试剂均为分析纯。P680高效液相色谱仪，UVD170U检测器，DIODE色谱数据工作站(美国戴安公司)，DT-230A型柱温箱;SP8810高效液相色谱仪，SP200紫外检测器，N2000色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。TU-1800SPC紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

实验条件:①色谱条件:色谱柱为phenomenex C18(4.6×250 mm，0.5 μm)，流动相为甲醇 -0.1%磷酸(85∶15)，柱温35℃，流速1 ml/min，检测波长254 nm;理论板数以大黄酚计不应低于2 500。②溶液制备:分别采用甲醇稀释法制备对照品溶液，甲醇回流提取、三氯甲烷萃取法制备供试品(含决明子)及阴性样品溶液(不含决明子)。

测定项目、方法及结果:①专属性:按上述色谱条件，取上述3种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录谱图。结果表明，供试品色谱图中与对照品色谱峰相应的位置上有相同的色谱峰，主峰与其他色谱峰之间分离良好;在阴性溶液色谱图中，与大黄酚保留时间相同的位置上无色谱峰，表明处方中其他组分对大黄酚含量测定无干扰;大黄酚主峰理论塔板数＞2 500，与其他峰之间分离度均＞1.5，满足含量测定要求。②线性关系:精密称取大黄酚对照品12.68 mg，置50 ml量瓶中，用无水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶解并定容至刻度，作为线性测定储备液，分别精密吸取储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 ml置 25 ml量瓶中，用无水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)稀释至刻度，摇匀，分别取20μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以进样量(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。其回归方程为:Y=74.979X-0.078 7，r=0.999 9。结果表明大黄酚在 0.12 ～4.04 μg 范围内线性关系良好。在0.101～0.812μg范围内线性关系良好。③精密度:a重复性:取样品5份，每份约3 g，精密称定，按供试品溶液制备方法和色谱条件测定大黄酚的含量。结果显示重复性良好。b中间精密度:取样品约3 g精密称定，按上述试验确定的供试品溶液制备方法和色谱条件，于同一实验室，不同日期、不同分析人员行大黄酚含量测定。结果显示中间精密度良好。④稳定性试验:取供试品溶液制备方法项下提取样品溶液，室温下放置，于 0、2、4、6、8、10 h分别进样，测定其峰面积，平均峰面积为44.563;RSD%=0.16%。结果表明供试品溶液在10 h内稳定。⑤检测范围:取1.5、3、4 g样品精密称定，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定大黄酚含量。结果表明，在标准取样量的±50%范围内，测定样品含量结果基本稳定。⑥加样回收率试验:取已知大黄酚含量(0.210 mg/g)的千柏鼻炎片适量，精密称定，精密加入大黄酚对照品适量，按供试品溶液的制备方法及上述色谱条件进行测定，计算回收率。结果表明回收率良好。

讨论:高效液相色谱技术以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。目前其已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。本研究采用高效液相色谱技术测定千柏鼻炎大黄酚含量，结果表明其专属性、线性关系、精密度、稳定性、检测范围、回收率均较好，证实高效液相色谱技术可用于千柏鼻炎片中大黄酚含量的测定。