子痫前期患者胎盘组织中 HSP-27的表达变化及意义

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(1井冈山大学附属医院,江西吉安 343000;2井冈山大学医学院)

近年来,普遍认为子痫前期发病与胎盘滋养细胞缺血、缺氧有关。研究表明,机体在缺血、缺氧这种应激状态下,作为分子伴侣的热休克蛋白能提高细胞对应激损伤的耐受性,发挥抗氧化损伤的作用[1]。2008年 9月～2009年 12月,本研究观察子痫前期患者胎盘滋养细胞中热休克蛋白 27(HSP-27)的表达变化,并探讨其与子痫前期发生的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 子痫前期产妇 26例,年龄 22～36岁,孕周 37～40周。其中轻度 12例 (轻度组)、重度 14例(重度组)。健康孕妇 30例(对照组),年龄24～32岁,孕周 37～41周。三组均为单胎。三组产妇年龄、孕周等一般资料相比,P均 ＞0.05。均以剖宫产终止妊娠。

1.2 胎盘组织中 HSP-27的检测 三组胎盘娩出后,在胎盘脐带附着处母体面的中心部位,剪下 1 cm×1 cm×1 cm的组织,每组各 2块。漂洗干净后,1块用 10%中性甲醛固定,室温梯度酒精脱水,石蜡包埋;另 1块用 EP管装好后迅速放入 -70℃冰箱保存。采用免疫组化法及 Western blot法测各组胎盘组织中的 HSP-27。①免疫组化检测结果判定:以细胞核或细胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒为HSP-27阳性细胞。a.按阳性细胞百分比计分[2]:阳性细胞百分比 ＜5%、5～10%、11%～50%、＞50%分别记 0、1、2、3分 。b.按着色程度计分 :着色浅,但与未着色的阴性对照片有明显区别记 1分;染色强度为中等者记 2分;细胞着色与已知阳性照片同样强记 3分。上述两项记分相加,0分为 HSP-27阴性、1～2、3～4、5～ 6分分别为弱阳性、阳性 、强阳性。弱阳性～强阳性为 HSP阳性。②Western blot检测结果分析:用 Fluor-s凝胶成像分析系统对蛋白条带进行分析,计算蛋白相对含量。

1.3 统计学方法 采用 SPSS16.0统计软件。计量资料比较用方差分析,计数资料比较用 χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

HSP-27定位于滋养细胞胞质和胞核,以胞质为主。对照组 HSP-27表达阳性 8例,轻度、重度组分别为 9、13例,三组相比,P均 ＜0.05。对照组、轻度组、重度组 HSP-27蛋白相对表达量分别为 0.33±0.10、0.56±0.16、0.96±0.25,三组相比,P均 ＜0.01。

3 讨论

HSP是生物细胞受到热、病原体、理化因素等有害刺激后启动合成的蛋白质。HSP最主要的功能是在细胞遭受应激损害时,可作为分子伴侣,提高应激状态下细胞对应激损伤的耐受性[3,4]。HSP可分为五大家族,分别是 HSP110、HSP90、HSP70家族、中等分子量 HSP60家族和小分子量HSP(sHSP)家族。目前对 sHSP的研究甚少。HSP-27是 sHSP家族重要成员之一。研究[4]显示,HSP-27在小鼠缺血—再灌注诱导的氧化应激损伤心脏组织中大量表达。

近年来,缺氧引起的氧化应激反应与子痫前期发生发展的关系逐渐受到重视。氧化应激反应的增强可能导致子痫前期病情不同程度的加重[5]。Shah等[6]研究发现,在早、中、晚孕的蜕膜间质细胞中均可检测到 HSP-27,其仅在早中孕的合体滋养细胞中表达,主要表达于细胞质。Dodge等[7]发现子痫期胎盘滋养细胞中 HSP-27表达增加。

本研究分别采用免疫组化法及 Western blot法检测了正常孕妇与轻、重度子痫前期患者胎盘组织的 HSP-27,结果显示,HSP-27在子痫前期患者合体滋养细胞胞质及胞核中表达,且以胞质为主,与相关研究结果一致;轻、重度组胎盘组织中 HSP-27蛋白相对表达量高于对照组,且重度组高于轻度组,提示子痫前期患者胎盘组织 HSP-27蛋白表达水平升高,且与子痫前期严重程度有关。由此我们推测,缺氧导致的氧化应激参与了子痫前期发病,而 HSP-27高表达对子痫前期胎盘组织有保护作用。其机制可能为:HSP-27发挥分子伴侣作用,促进错误蛋白质的降解,防止蛋白质变性,促使胎盘组织细胞从应激中恢复;发挥抗氧化应激作用,保护细胞及细胞器如线粒体免受损伤,减少 Ca2+内流,减轻其引起的细胞毒性及细胞凋亡;抑制炎症发展,降低进一步的血管内皮损伤及缺血、缺氧。HSP-27在子痫前期胎盘组织中的作用及其确切机制尚待进一步研究。

[1]Malusecka E,K rzyzowska-Gruca S,Gawrychowski J,et al.Stress proteins HSP27 and HSP70 predict survival in non-small cell lung carcinoma[J].Anticancer Res,2008,28(1B):501-506.

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[4]Mosser DD,Morimoto RI.Molecular chaperones and the stress of oncogenesis[J].Oncogene,2004,23(16):2907-2918.

[5]石春燕,孙丽洲,德伟,等.子痫前期患者胎盘组织氧化应激与PeroxiredoxinⅡ[J].现代妇产科进展,2008,17(12):929-931.

[6]Shah M,Stanek J,Handwerger S.Differential localization of heat shock proteins 90,70,60 and 27 in human deciduas and placenta during pregnaney[J].Histochem J,1998,30(7):509-518.

[7]Dodge ME,Wang J,Guy C,et al.Stress-induced heat shock protein 27 expression and its role in dorsal root ganglion neuronal survival[J].Brain Res,2006,1068(1):34-48.