高效液相色谱法测定水果中吡虫啉农药残留量

何进林，张志华

(1.广西出入境检验检疫局贺州办事处，广西 贺州 542800；2.山西出入境检验检疫局技术中心，山西 太原 030024)

高效液相色谱法测定水果中吡虫啉农药残留量

何进林1，张志华2

(1.广西出入境检验检疫局贺州办事处，广西 贺州 542800；2.山西出入境检验检疫局技术中心，山西 太原 030024)

建立高效液相色谱法测定水果中的吡虫啉残留量的检测方法。采用改进的QuEChERS方法，乙腈匀浆提取，提取液加C18和PSA填料净化，液相色谱法检测。结果表明：方法的定量检测限为0.05mg/kg，标准曲线线性相关系数0.9988；当添加水平在0.05～0.20mg/kg范围内时，回收率均可在92%～102%之间，相对标准偏差在5%～11%之间。本方法是一种快速、准确、灵敏度高的同时检测水果中吡虫啉残留的检测方法。

水果；高效液相色谱法；吡虫啉

吡虫啉为高效广谱杀虫剂，具有内吸、胃毒、拒食、驱避作用，其毒性呈典型的昆虫神经干扰作用，主要用来防治刺吸式口器害虫。近年来，吡虫啉在果树上的使用量的逐年增加。目前，国内外已制订了多种农产品中吡虫啉残留限量标准，尤其是日本开始实施的“肯定列表制度”，对农药的限量进行了严格规定，例如梨中的限量为1mg/kg[1]。为使我国水果产品顺利出口，探索水果中吡虫啉残留快速准确的分析方法显得极为迫切，吡虫啉的测定方法多为色谱法，但操作繁琐，文献[2-15]报道用乙腈或乙醇提取样品，经反萃取或固相萃取净化后进行测定。本实验结合QuEChERS前处理技术，采用HPLC法检测。QuEChERS方法是2003年由美国化学家Steven J. Lehotay 和德国Michelangelo Anastassiadas 提出的一种快速、简单、低成本的样品处理方法，该方法的关键是采用分散固相萃取净化法，即提取液直接加入PSA吸附剂粉末进行净化，经离心后上清液上机检测[15-17]。本实验在此方法的基础上，对样品的提取及净化都进行了改进，除用PSA粉外，加入ODSC18粉提高净化效果，旨在为水果中吡虫啉残留量的检测方法的建立提供一定的参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

水果 市售。

乙腈(色谱纯)、Cleanert PSA填料、Cleanert C18填料、0.45μm的有机相滤膜 博纳艾杰尔科技；氯化钠(分析纯) 天津科密欧公司；吡虫啉(imidacloprid)标准品(纯度97.0%) Dr.Ehrenstorfer公司。

吡虫啉标准溶液：准确称取标准品溶于乙腈，配成100μg/mL的储备液，使用时再稀释成适当质量浓度的标准工作溶液。

1.2 仪器与设备

2690高效液相色谱仪(配有紫外检测器) 美国Waters公司；23K台式高速冷冻离心机 美国Sigma公司；Vortex Genie2旋涡混合器 美国Vortex-Genie公司；FASTH21高通量匀浆机 瑞士Consual公司。

1.3 色谱分析条件

色谱柱：Ultimate OR C18(4.6mm×250mm，5μm)；柱温：室温；流速：1.0mL/min；检测波长：270nm；进样量：20μL；流动相为乙腈-水(70:30，V/V)。

1.4 样品处理

取试样可食用部分，粉碎并混合均匀，准确称取5g(精确至0.01g)，置于匀浆管中，加入10.0mL乙腈和1g氯化钠，10000r/min匀浆1min。以4000r/min离心5min。取1mL上清液加入25mg PSA和25mg C18，涡流混合30s，过0.45μm的有机相滤膜待测。

1.5 高效液相色谱法测定

将配制好的标准溶液和处理好的样品溶液按照1.3节的色谱条件依次进样，进行定性及定量分析。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

在190～400nm波长范围内对吡虫啉标准溶液进行波长扫描，在270nm波长处有最大吸收。因此本实验选270nm为检测波长。流动相中乙腈的比例越高，吡虫啉出峰越早，比较流动相V(乙腈):V(水)为80:20、70:30、50:50三种比例，发现当流动相比例为V(乙腈):V(水)=70: 30时，目标峰和杂质可以实现完全分离，而且峰型较好。因此选取流动相比例为V(乙腈):V(水)=70:30。

2.2 提取净化条件的选择

综合国内外文献，农产品中吡虫啉残留的提取溶剂有4种，即乙腈、甲醇、丙酮、乙酸乙酯。考虑到乙腈是一种多残留方法中常用的溶剂，对于方法的多残留农药检测的适用性，而且它在饱和NaCl溶液的存在下能很好的与水分层，使得溶于水的一部分干扰杂质被去除，而对于非极性干扰物可以进一步用固相萃取等方法净化，这样可以避免CH2Cl2的使用。因此用乙腈作为提取溶剂提取吡虫啉农药。

原QuEChERS快速多农药残留分析方法采用振荡提取，然后从提取液中取2mL进行净化；改进后的方法采用乙腈均质提取，提取效率更高，尤其对于纤维较长、不易制备为均匀试样的样品。水果中主要是一些有机酸、部分色素、维生素有干扰。PSA去除脂肪酸效果较好，在去除色素、甾醇和维生素方面效果一般，而ODS C18可以去除一些维生素、色素、甾醇。对于色素石墨化炭黑的去处效果最佳，但是水果提取液中量不大，当加入PSA和C18时即可满足要求。因此本方法加入两种填料来净化。分别加入PSA和C18两种填料5、10、25、40、50mg比较净化效果，发现随着填料的增多，净化效果越来越显著，当增加到25mg后再增加没有效果，固最终确定为添加PSA和C18各添加25mg，同时做了回收率实验，发现回收率满足要求。

按本实验方法处理的苹果、梨的空白色谱图和添加0.05mg/kg吡虫啉的色谱见图1，可以看出本方法处理的样品对吡虫啉的检测没有干扰。

图1 各样品的色谱图Fig.1 Chromatogram of each sample

2.3 标准曲线和检出限

将吡虫啉标准贮备液依次稀释至0.02、0.05、0.10、0.20、0.50μg/mL的系列标准溶液，用上述色谱条件进行色谱分析。每个质量浓度进样至少重复3次，得到峰面积的平均值。根据不同进样浓度和相应峰面积大小绘制吡虫啉的标准曲线，以峰面积为纵坐标，以进样质量浓度为横坐标绘制标准曲线。吡虫啉标准曲线线性方程是y=9×10-6x-0.0016，相关系数为r=0.9988，线性范围为0.02～0.50μg/mL。

按照国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)的定义，定量限以RSN＞10计。以空白基质加标的方法，确定本方法定量限为0.05mg/kg，完全符合国内外最高残留限量(MRL)的要求。吡虫啉的液相色谱见图2。

图2 0.025mg/L吡虫啉标准色谱图Fig.2 Chromatogram of imidacloprid standard

2.4 精密度和回收率实验

用空白样品加标方法进行回收率和精密度实验。分别对苹果和梨进行3个不同水平的加标，每个水平平行测定10次，计算回收率和相对标准偏差，结果见表1。从表1可以看出，当添加水平在0.05～0.20mg/kg范围内，回收率均可在92%～102%之间，相对标准偏差在5%～11%之间。

表1 水果中吡虫啉残留量的回收率和变异系数(n=10)Table 1 Recovery rates and relative standard deviations ofimidacloprid residue in spiked blank fruits (n=10)

3 结 论

本实验建立高效液相色谱检测苹果、梨中吡虫啉残留量的方法，该法的定量限为0.05mg/kg，可以满足国内外对水果中吡虫啉残留量的要求；方法的回收率和精密度符合实验要求，同时方法简便、易操作、成本低，适用于日常检验。

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Determination of Imidaclprid Residue in Fruits by HPLC

HE Jin-lin1，ZHANG Zhi-hua2
(1. Hezhou Dumex, Guangxi Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Hezhou 542800, China；2. Technology Center, Shanxi Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Taiyuan 030024, China)

A high performance liquid chromatography (HPLC) method was developed to determine imidaclprid residue in fruits. Samples were extracted by the improved QuEChERS method using acetonitrile as the solvent and purified on C18/PSA column. The detection limit of this developed HPLC method was 0.05 mg/kg and the linear correlation coefficient of standard curve was 0.9988. Recovery rates for imidaclprid in spiked samples at 0.05, 0.1 mg/kg and 0.20 mg/kg was in the range of 92%-102% with a relative standard deviation varying from 5% to 11%. Therefore, this developed method is characteristics of rapid determination, high accuracy and sensitivity so that it is suitable for the detection of imidaclprid residue in fruits.

fruits；HPLC；imidaclprid

O651；TS207.53

A

1002-6630(2011)06-0230-03

2010-05-07

何进林(1972—)，男，工程师，研究方向为化工矿产品和食品理化检测。E-mail：87418262@qq.com