导流杂交基因芯片技术在人乳头瘤病毒基因分型中的应用

2011-03-19 00:14
郑州大学学报(医学版) 2011年3期
关键词:同年龄组危型导流

张 艺

郑州市中心医院检验科郑州 450007

人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是一种小分子双链DNA病毒,可致人类皮肤和黏膜异常增生,是诱发女性宫颈癌及生殖器病变的主要病源。在超过 95%的早期浸润和浸润性宫颈癌中,至少发现20种致癌 HPV亚型,根据其致病性差异可分为高危型和低危型[1],其中高危型 HPV与宫颈癌和宫颈上皮瘤变有关,低危型HPV与外生殖器尖锐湿疣等良性病变有关[2]。作者对郑州市中心医院就诊的354例宫颈糜烂患者进行HPV基因分型检测,现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选择 2008年 10月至 2010年 8月郑州市中心医院妇科收治的宫颈糜烂患者共 354例,年龄 20~63岁。标本采集:将专用宫颈刷置于宫颈口,轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转 5圈,取出宫颈刷,折断刷头置入加有专用细胞保存液的取样管中,拧紧瓶盖。4℃保存,2周内检测。

1.2 仪器与试剂 实时荧光定量PCR扩增仪(美国ABI 7300),HybriMax医用核酸分子快速杂分仪(中国凯普生物科技有限公司)。HPV DNA抽提试剂盒、HPV基因分型检测试剂盒(中国凯普生物科技有限公司),可检出 21种亚型,包括高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和 68),低危型(6、11、42、43和 44)及3种中国人群常见高危型(53、66和CP8304)。

1.3 DNA提取及HPV各基因型检测方法 取宫颈细胞保存液0.5mL,14 000 r/min离心5 min,弃上清液,按HPV DNA抽提试剂盒提取DNA。PCR扩增:反应总体系 25μL,每次实验设一个阴性对照及阳性对照。PCR反应条件为20℃10 min;95℃9min;循环40次(95℃20 s,55℃30 s,72℃30 s); 72℃延伸5 min。导流杂交:①取PCR扩增产物20 μL,95℃加热5 min,冰水浴2m in。②杂交孔内加入1m L预热至45℃的杂交液。③把步骤①制备的已变性DNA样品溶液加入0.5 mL预热至45℃的杂交液,混匀,加在芯片薄膜上温育10 min后开泵进行导流杂交。④45℃条件下,预热 45℃杂交液冲洗膜 3次。用凯普专用阅读仪对结果进行判读。每张芯片上均设有PCR反应质控点和杂交显色质控点各一个。

1.4 统计学处理 采用SPSS 10.0进行分析,对不同年龄组HPV感染人数行χ2检验,检验水准α=0.05。

2 结果

354例宫颈糜烂患者中,HPV阳性率为37.8% (134/354),21种HPV亚型均被检出,共检测出230例次。HPV各基因分型检出例次见表 1。不同年龄组HPV的感染情况比较结果见表2。

表1 HPV各基因分型检出例次比较(n=354)

表2 不同年龄组HPV的感染情况比较

3 讨论

在HPV的基因型检测中,目前主要采用实时荧光PCR法及杂交捕获法。导流杂交技术将基因PCR扩增技术及基因芯片技术集于一身,最大限度地发挥了上述技术的特点,有较高的敏感度和特异性,可检测 21种HPV亚型,而且包含了3个中国人常见的高危亚型,增加了HPV各亚型尤其是高危型HPV亚型感染的检出率及不同亚型复合感染的检出率,并可在数小时内获得结果,能为患者和临床提供非常有价值的诊疗依据,是目前较好的HPV分型检测方法[3]。

据WHO研究[4]统计,曾感染HPV的人数在性活跃期男女中的比率为 40%,它们广泛存在于成年人族群中,一般 HPV感染者无临床症状,大部分感染了HPV的妇女将会发展为轻度宫颈损伤,而大多数轻度损伤都可以自行恢复,只有持续存在的高危感染才可能引起癌前病变。作者在 354例标本中共检出134例HPV感染者,HPV感染率为37.8%;21种基因型均被检出。高危型主要是 16、18型,与文献[5]结果一致。从表2可看出20~岁年龄段HPV感染率较高,其次为 31~岁年龄组,这可能和这个年龄段性活跃有关。单一低危型感染患宫颈癌或高度病变的风险很低,而高危型感染、持续感染患宫颈癌或高度病变的风险增大[6]。因此,准确检测HPV感染及其分型对宫颈癌筛查、早期确诊及预后判断等具有重要的临床意义。

[1]Muñoz N,Bosch FX,de SanjoséS.Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer[J].New Engl JMed,2003,348(6):518

[2]徐虹,全培良,王珍珍,等.人宫颈癌组织中Survivin蛋白及人乳头瘤病毒 16、18感染检测[J].郑州大学学报:医学版,2007,42(6):1104

[3]赵健,杨英捷,廖秦平.导流杂交基因芯片技术在人乳头状瘤病毒感染分型检测中的临床应用[J].中华检验医学杂志,2006,29(12):1148

[4]欧华,卞美璐,张小燕,等.实时荧光定量聚合酶链反应技术在人乳头状瘤病毒检测中的应用研究[J].中日友好医院学报,2006,20(5):270

[5]姜宏宇,张美花,韩艳,等.韩国与中国延边地区宫颈病变组织中人乳头瘤病毒感染类型比较[J].吉林大学学报:医学版,2009,35(4):746

[6]赵奕,徐宝甜.人乳头瘤病毒基因与宫颈癌关系研究进展[J].国际检验医学杂志,2006,27(6):516

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