染料木素自乳化制剂的处方研究

李大维，柴宝丽

(哈药集团制药六厂，哈尔滨150056)

染料木素(genistein)为异黄酮类化合物，化学名称为5，7，4'－三羟基黄酮(C15H10O5)，难溶于水，具有明显防治骨质疏松症、心血管疾病和抗肿瘤等多种药理作用［1］.自乳化药物传递系统(Self－emulsifying drug delivery systems，SEDDS)是由油、表面活性剂和助溶剂组成的均一混合物，当它进入胃肠道遇到水相介质可在轻微搅拌和胃肠的蠕动下自发乳化形成乳剂.研究表明SEDDS的快速自发乳化和在吸收部位的高度分散能有效的提高水难溶性药物的口服吸收［2－4］.本文通过绘制伪三元相图和体外自乳化效率的评价来优化染料木素自乳化制剂的处方.

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津 LC—10A高效液相色谱仪(配SPD—10紫外可见检测器，CK chrom色谱工作站);;HZQ－C空气振荡器(哈尔滨市东联电子技术开发有限公司);79HW—1型恒温磁力搅拌器(浙江乐清乐成电器厂);LS230粒度测定仪(美国Beckman Coulter);FA2104电子天平(上海精密仪器科学有限公司).

1.2 试药

染料木素(陕西慧科科技开发有限公司，纯度＞98%);染料木素对照品(中国药品生物制品检定所);染料木素普通胶囊(染料木素50 mg，微晶纤维素75 mg，羧甲基淀粉钠75 mg);Cremophor EL 35(BASF公司);油酸乙酯(北京长城化学试剂有限公司);Tween 80(北京益利精细化学品有限公司);Transcultol P(法国佳法赛公司);其他试剂均为分析纯.

2 实验方法与结果

2.1 SEDDS的制备

称取适量的染料木素，加入处方量的油相、乳化剂和助溶剂，在40°C，100 r/min空气振荡器中振荡24 h左右使染料木素完全溶解.

2.2 相图的绘制:

采用伪三元图的方法，分别以油酸乙酯和Miglyol812为油相、吐温80(Tween 80)和T50C50(50% Tween80－50%Cremophor EL35)为乳化剂、Transcultol P为助溶剂，以油相、乳化剂和助乳化剂各为一边，所有处方中染料木素的质量分数均为辅料的10%，按“2.1”项下配制药液，所得药液室温放置48 h，通过外观观察是否产生分层现象，将可形成均一、透明药液的处方确定为可形成自乳化区域的点.

自乳化制剂处方中，助溶剂占0～30%(w)，在本研究中选择Transcultol P作为助溶剂，主要作用是溶解药物，其占辅料总重的5%以上.当Transcultol P的比例过高，不利于轧制软胶囊，因此筛选助溶剂的比例在5%～25%范围内，表面活性剂占辅料总重的30%～70%(w)，由图1可见，以T50C50(50%Tween80－50%Cremophor EL35)为混合乳化剂所形成的自乳化区域略大于以Tween80单独作为乳化剂，以油酸乙酯(Ethyl oleate)为油相时所形成的自乳化区域远大于以Miglyol 812为油相.因此在进一步研究中选定油酸乙酯为油相，比较乳化剂种类和乳化剂用量对处方的影响.

图1 伪三元相图(实心的方形代表所作的处方，用线所围成的区域为可形成自乳化的区域)

2.3 体外自乳化效率

精密取0.2 mL上述所配溶液，加入100 mL 37℃的蒸馏水，用磁力搅拌器低速温和搅拌，肉眼观察所配溶液完全乳化的时间和所形成乳剂最后形态，所有实验均重复2遍，见表1.

表1 不同染料木素自乳化制剂的自乳化效率评价

在所考察的处方中自乳化时间随着乳化剂含量的增加先减小后增大，在乳化剂质量分数为55%和50%时，自乳化时间最短，这可能是由于乳化剂质量分数较大时，黏度对乳化速度的影响较大，而当乳化剂质量分数较小时，乳化剂质量分数对乳化速度起主要作用.不同乳化剂(Tween80，T50C50)对自乳化时间无显著的影响，但当乳化剂的用量较低时对外观有显著的影响，以Tween 80为乳化剂用量为45%时，所形成乳剂呈浅白色，以T50C50为乳化剂用量为40%时，所形成乳剂仍呈淡蓝色.由于SEDDS处方中使用了大量的表面活性剂，长期服用可能对机体产生毒性，而助溶剂可能与胶囊壳相互作用导致药物渗出，故在表面活性剂量和助溶剂量尽可能小的前提下，以自乳化速率较大及乳化后的粒径较小为原则，最终确定处方为油酸乙酯－T50C50－丙二醇质量比为45∶45∶10.

2.4 乳滴粒径的测定

取含质量分数分别为5%、10%和20%的染料木素自乳化制剂，用不同的介质(蒸馏水，0.1 mol/ L盐酸和pH值为6.8磷酸盐缓冲液)稀释100倍后，测定其粒径，结果见表2.可见，不同的乳化介质对后乳滴的粒径基本没有影响.随着药物的增加，乳滴的粒径有所增加，但没有明显的区别.当载药量达到20%时，有药物析出，为了确保制剂的稳定性，最终选择含药量为10%.

2.5 样品含染料木素量测定

色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18柱(200 mm ×4.6 mm I.D.，5 μm);以甲醇－0.05%磷酸(60∶40)为流动相;流速为1.0 mL/min;检测波长为260 nm，柱温为30℃，进样量为10 μL.

表2 染料木素自乳化制剂在不同介质中的粒径

色谱系统适应性:标准曲线:A=20 456 C+ 20.465(r=0.999 8);线性范围:0.1～5 μg/mL;日内和日间精密度分别为0.84%和1.25%;回收率为99.1%，RSD=1.2%;空白辅料不影响测定.

含量测定方法:精密称定适量染料木素自乳化制剂(约含染料木素50 mg)置50 mL量瓶中，用甲醇溶解定容，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液.取供试品溶液10 μL进行HPLC测定.结果见表3.

表3 样品含染料木素量测定结果(n=3)

3 讨论

由于染料木素溶解后呈黄色，本文通过观察染料木素溶解后溶液的颜色来判断溶解程度，结果表明染料木素在Transcultol P中的溶解度远大于其他所选的辅料，因此选用Transcultol P作为助溶剂.

自乳化效率指的是自乳化系统自发形成乳剂的能力，包括乳化速率和乳化后所得乳剂的粒径.自乳化速率是评价SEDDS自发形成乳剂的能力的一个重要指标，可以通过目测观察，电导或浊度的变化来检测［5］.本研究通过目测观察SEDDS在溶液中完全分散所需的时间，即自乳化时间，并通过肉眼观察所形成乳剂的澄明度，来比较处方组成对制剂的影响.

Pouton［6］指出使用亲水性表面活性剂与亲油性表面活性剂的混合物可以产生有效的乳化，增加处方中药物的溶解能力，Li P等研究表明使用混合表面活性剂Tween20－Cremophor EL(50∶50)作为氟比洛芬自乳化制剂的乳化剂，体系的乳化效率远大于单独使用Tween20和Cremophor EL，同时可增大载药量，提高制剂的稳定性［7－8］.

［1］ 黄 枚，陈利铭.染料木素防治癌症的研究进展［J］.海峡药学，2000，12(3):9－10.

［2］ CONSTANTINIDES P P.Lipid microemulsions for improving drug dissolution and oral absorption;physical and biopharmaceutical aspects［J］.Pharm Res.，1995，12(11):1561－72.

［3］ GURSOY R N，BENITA S.Self-emulsifying drug delivery systems(SEDDS)for improved oral delivery of lipophilic drugs［J］.Biomed Pharmacother.，2004，58(3):173－82.

［4］ CHARMAN S A，CHARMAN W N，ROGGE MC，et al.Self-emulsifying drug delivery systems:formulation and biopharmaceutic evaluation of an investigational lipophilic compound［J］.Pharm Res.，1992，9:87－93.

［5］ POUTON C W.Self-emulsifying drug delivery systems:assessment of the efficiency of emulsification［J］.Int J Pharm.，1985，27:335－48.

［6］ POUTON C W.Formulation of self-emulsifying drug delivery systems［J］.Adv Drug Del Rev.，1997，25(4):47－58.

［7］ LI P，GHOSH A，WAGNER R F，et al.Effect of combined use of nonionic surfactant on formation of oil-in-water microemulsions［J］.Int J Pharm.，2005，288(1):27－34.

［8］ 夏丽文，李大维，张丽杰.染料木素自乳剂的制备及溶出度研究［J］.哈尔滨商业大学学报:自然科学版，2010，26(4): 398－399，412.