高效液相色谱法测定舒筋活血分散片中4－甲氧基水杨醛含量

杨其军 ，诸葛周，余允建，戴德雄，李金和

(1.浙江省诸暨市中医院药剂科，浙江 诸暨 311800;2.浙江维康药业有限公司，浙江 丽水 323000)

舒筋活血片由红花、香附、狗脊、香加皮等味药组方，具有舒筋活络、活血散瘀之功效，用于筋骨疼痛、肢体拘挛、腰背酸痛、跌打损伤。该药作为一种治疗跌打损伤的内服药物，在临床上有一定的应用范围。原质量标准检验项目简单[1]，无法有效控制其内在质量。笔者将原有素片改制成分散片，并参考文献[2]，采用高效液相色谱法对舒筋活血分散片中香加皮的4－甲氧基水杨醛进行了含量测定，为该制剂的质量控制提供了快速、简便、准确的测定方法。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪;Sartorius BP211D型电子天平;USC－502型超声波清洗器;TU－11901型紫外分光光度计。样品(浙江维康药业有限公司试制，仅供本试验用，批号分别为20081201，20081202，20081203，20081204，20081205);4－甲氧基水杨醛对照品(批号为110790－200202，供含量测定用，中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Aichrom Reliasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－ 水－ 四氢呋喃(50 ∶50 ∶0.2);流速:1.0 mL/min;检测波长:344 nm;柱温:室温;进样量:20 μL。

2.2 溶液制备

取4－甲氧基水杨醛对照品适量，用60%甲醇直接溶解制成每1 mL含0.02 mg的对照品溶液。取本品10片，精密称定，研细，取细粉约2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理40 min，取出，放冷，再称定质量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀，静置，取上清液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。按处方工艺制备缺香加皮药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:分别取对照品溶液、阴性对照品溶液和供试品溶液，依法进样，色谱图见图1。可见，色谱基线平稳，辅料、杂质对测定无干扰。

线性关系考察:精密称取4－甲氧基水杨醛对照品适量，加甲醇制成每1 mL含4－甲氧基水杨醛0.035 8 mg的溶液，摇匀，分别精密吸取该溶液 2，4，6，8，10，14，18 μL，按拟订的色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标、进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=4×106 X+37 312，r=0.999 2(n=7)。结果表明4－甲氧基水杨醛进样量在0.071 6～0.644 4 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，在拟订的色谱条件下连续进样测定。结果峰面积的 RSD为0.67%(n=6)，表明仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

重现性试验:取同一批样品，依法制备供试品溶液，在拟订的色谱条件下测定峰面积，计算含量。结果含量的 RSD为1.85%(n=5)，表明方法的重现性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于配制后0，4，8，12，16 h时进样测定峰面积。结果峰面积的 RSD为0.88%(n=5)，表明供试品溶液在16 h内稳定。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为20081201)适量，6 份，分别精密加入对照品溶液(0.026 4 g/L)8.0，10.0，12.0 mL，再分别加60%甲醇至25 mL，按拟订的色谱条件测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 4－甲氧基水杨醛加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取5批样品，依法制备供试品溶液，按拟订的色谱条件测定，以外标法计算含量。结果批号为20081201，20081202，20081203，20081204，20081205的样品中 4－甲氧基水杨醛含量分别为0.138，0.135，0.132，0.140，0.124 mg/片。

3 讨论

取4－甲氧基水杨醛对照品，进行紫外扫描(190～400 nm)，结果在279 nm波长处有最大吸收，故选择279 nm为检测波长。曾用Aichrom Reliasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)与 Kromtek C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)为分析柱，二者均达到满意的分离效果(主峰与相邻峰分离度大于1.5，理论板数以4－甲氧基水杨醛峰计算均大于4 000)，综合考虑，选用前者为试验用色谱柱。

试验还对样品提取方法和提取溶剂进行了比较，结果以60%甲醇为提取溶剂时，4－甲氧基水杨醛的含量较高;超声处理与加热回流相比，结果非常相近，考虑到前者更简便、快捷，选择超声处理样品。同时，对超声并对提取时间(20，30，40，50 min)进行了考察，结果超声处理40 min，4－甲氧基水杨醛含量不再增加，故选择提取时间为40 min。

[1]WS3－B－2624－97，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂[S].

[2]黄 萍，刘 杰.舒筋活血片质量标准研究[J].基层中药杂志，2000，14(1):16－17.