高效液相色谱法测定鼻窦炎口服液中栀子苷含量

(湖南省张家界市药品检验所，湖南 张家界 427000)

鼻窦炎口服液由辛夷、薄荷、白芷、黄芩、苍耳子、栀子、川芎、茯苓、龙胆草等14味药组方，具有疏散风热、清热利湿、宣通鼻窍的功效，主要用于风热犯肺、湿热内蕴所致的鼻塞不通、流黄稠涕，急慢性鼻炎、鼻窦炎见上述证候者[1]，临床应用较多，疗效较好。2010年版《中国药典(一部)》中，建立了该药的黄芩苷含量测定方法。为更好地控制药品质量，笔者采用高效液相色谱(HPLC)法对鼻窦炎口服液中栀子所含栀子苷进行了含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－20AT型高效液相色谱仪(日本岛津)，包括岛津PDAM20A型二极管阵列检测器，SIL－20A型自动进样器，CBM－20A型系统控制器，CTO－10ASVP型柱温箱，LCsolution色谱工作站;AUW220D型电子分析天平(岛津);KQ2200DB型数控超声波清洗器(昆山超声仪器公司)。栀子苷对照品(批号为110749－200714，供含量测定用，中国药品生物制品检定所);鼻窦炎口服液(太极集团重庆桐君阁药厂有限公司，批号为 10010002，09100089，09030024，本地市售品);乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:岛津 Shimpack VP－ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.2% 磷酸(12 ∶88);检测波长:238 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:25 ℃;进样量:10 μL。理论板数按栀子苷计应不低于5 000。

2.2 溶液制备

精密吸取样品1 mL，置50 mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥24 h后的栀子苷对照品11.78 mg，置 100 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含0.117 8 mg的溶液，作为对照品溶液。另按处方组成[2]制成缺栀子的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，依法测定。结果阴性对照品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱栀子苷峰相应保留时间附近无干扰峰检出，见图1。

线性关系考察:精密吸取栀子苷对照品溶液(0.117 8 g/L)2，4，6，8，10，15 μL 进样，按上述色谱条件测定。以栀子苷进样量(μg)为横坐标(X)、测得的峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线，回归方程为Y=1 546 989.9 X+7 479.7，r=0.999 9(n=6)。结果表明栀子苷进样量在0.235～1.767μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL，按上述色谱条件，重复进样6次，测定峰面积。结果的 RSD为0.58%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液10 μL，按上述色谱条件，分别在 0，2，4，8，12，24 h 时进样，测定峰面积。结果的 RSD 为1.06%(n=6)，表明供试品溶液至少在24h内基本稳定。

重现性试验:取同一批样品(批号为10010002)6份，分别精密吸取1 mL，依法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果平均含量为 12.61 mg/支(10 mL)，RSD=0.76%(n=6)，表明方法重现性较好。

加样回收试验:取已知含量的样品 (质量浓度为1.261 g/L)6 份，分别精密加入对照品溶液(0.117 8 g/L)10.0，20.0，30.0 mL，照供试品溶液制备方法制备待测液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 栀子苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3个不同批号的样品，依法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 uL，注入高效液相色谱仪，测定栀子苷的峰面积，以外标法计算含量。结果批号为10010002，09100089，09030024 的样品中栀子苷含量分别为 12.61，10.33，8.82 mg/支(10 mL)。

3 讨论

关于以高效液相色谱法测定中药复方制剂中栀子苷的含量，文献报道的方法较多[3]。为使样品中栀子苷峰与相邻色谱峰分离完全，选用乙腈－水系统为流动相，并加入少量的磷酸作为稳定剂。经多次试验，选择乙腈－0.2%磷酸溶液(12∶88)为流动相时，峰形好，保留时间适中，能使样品中栀子苷峰与相邻色谱峰达到基线分离，且阴性对照无干扰。利用二极管阵列检测器，对栀子苷峰及供试品溶液色谱中与栀子苷相同保留时间峰分别进行扫描，结果均在238 nm波长处有最大吸收，且经峰纯度检测为单一纯色谱峰，故确定检测波长为238 nm。

中药复方制剂质量标准中收载两种以上主成分的含量测定方法，对于提高和控制中成药的质量具有极积的作用。笔者在鼻窦炎口服液质量标准已有黄芩苷含量测定方法的基础上，建立了栀子苷含量测定方法，结果准确、操作简单、重复性、稳定性较好，可用于该产品质量标准的提高。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:1 212.

[2]WS3－B－2637－97，卫生部药品标准·中药成方制剂(第十三册)[S].

[3]余潇苓，方翠芬，祝 明.高效液相色谱法测定珍宝丸中栀子苷含量 [J].中国药业，2009，18(5):18.