盐酸地芬尼多在保存血液中的分解动力学研究1）

万东方，武 夺，武珊珊，贠克明

盐酸地芬尼多片作为非处方类抗晕动药之一，应用比较广泛，偶有中毒和死亡发生［1－3］。有关盐酸地芬尼多中毒的研究主要为毒物检测方法以及中毒和自杀的个案等方面的报道［4－6］，与中毒法医学鉴定有关的毒物动力学研究报道较少［7］。保存血液中的分解动力学未见报道。本实验采用盐酸地芬尼多染毒犬中毒模型，研究盐酸地芬尼多在保存血液中的分解动力学，为盐酸地芬尼多中毒法医学鉴定时检材保存和血药浓度的推断提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与分析条件

1.1.1 气相色谱仪（Finnigan） aw34色谱条件：NPD检测器，DB－5毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm），柱温：150℃（1 min）→10℃/min→280℃（2 min）；检测器：NPD，300℃，空气60 k Pa，氢气2.3 k Pa；载气：N21.5 m L/min。

1.1.2 气相色谱－质谱联用仪（Finnigan DSQ） 色谱条件：DB－5毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm），EI源70ev，质量范围：50～650，柱温：150℃（1 min）→10℃/min→280℃（2 min）；离子源温度：200℃，传输线温：250℃，载气：He 1.5 mL/min。

1.2 试剂 盐酸地芬尼多片（大连天宇海滨制药有限公司，批号：050703）；盐酸地芬尼多标准品购于公安部物证鉴定中心；其余试剂均为分析纯。

1.3 实验动物 本地杂种犬4只，15 kg～20 kg，雄性，山西医科大学实验动物中心提供。

1.4 提取与检测 血液1 m L，加水2 m L，匀浆5 min；取全部匀浆液，加入内标物SKF20μg，1 m L饱和NaCO3调p H＝9～

11，5 m L乙醚萃取，振荡15 min，离心3000 r/min×15 r/min，取上清液4 mL置于干燥离心管中。乙醚重新萃取一次。合并两次乙醚萃取液，40℃恒温水浴挥去乙醚。残渣加150μL乙醇定容，取1μL进样。保留时间结合特征离子峰（气－质联用）定性，内标法和标准曲线法（气相色谱）定量。

1.5 血液样品中的分解动力学 禁食隔夜犬4只，5 min内胃管匀速注入盐酸地芬尼多148 mg/kg，注入药物2 h后处死实验动物，采集心血，肝素抗凝。每只犬血分四等份分别置于20℃、4℃、NaF、－20℃环境中，于0、1 d、4 d、10 d、30 d、60 d检测血液中盐酸地芬尼多含量。

1.6 统计学处理 采用SPSS16.0软件处理。

2 结 果

2.1 气相色谱和气相色谱质谱图（见图1～4）

2.2 工作曲线 准确吸取不同量度盐酸地芬尼多标准品，分别加至1 mL空白血中，配制成系列标准血样，测0.5μg/m L～32 μg/mL范围，盐酸地芬尼多与内标峰面积比对浓度，成线性关系，相关系数r＝0.999，线性方程为Y＝0.053X＋0.049。

2.3 回收率和精密度 取空白检材1 m L，分别加入盐酸地芬尼多标准溶液，检测，测得回收率高于90%（结果见表1），变异系数CV＜3%。

表1 盐酸地芬尼多血液回收率实验结果（ ±s）

表1 盐酸地芬尼多血液回收率实验结果（ ±s）

加标浓度（μg/m L） 检出浓度（μg/m L） 回收率（%）5 4.98±0.12 99.6±2.410 10.23±0.26 102.3±2.620 18.32±0.30 91.6±1.5

2.4 分解动力学研究

2.4.1 保存血液中不同时间点盐酸地芬尼多的含量变化（见表2）

表2 不同时间点保存血液中盐酸地芬尼多含量变化（ ±s） μg/m L

表2 不同时间点保存血液中盐酸地芬尼多含量变化（ ±s） μg/m L

时段 20℃ 20℃（1%N a F）4℃ －20℃0 16.65±7.38 16.65±7.38 16.65±7.38 16.65±7.381 d 15.36±5.98 15.12±10.34 16.48±8.91 15.60±9.0010 d 15.68±7.20 15.91±9.33 16.31±8.20 13.92±7.3130 d 14.10±8.45 11.13±5.13 1） 13.52±5.54 13.53±5.7560 d 12.32±6.39 1） 10.26±5.74 1） 10.88±4.76 1） 11.40±4.51 1）120 d 12.87±1.4 1） 8.87±6.03 1） 9.12±3.96 1） 10.25±6.81 1）180 d 12.00±6.24 1） 7.58±5.31 1） 9.00±2.59 1） 10.65±8.60 1）240 d 11.34±5.12 1） 6.30±7.24 1） 8.88±4.56 1） 11.05±6.02 1）300 d 9.72±2.98 1） 5.25±4.28 1） 8.04±5.40 1） 11.01±5.92 1）与0时含量相比，1）P＜0.05

2.4.2 分解动力学参数 采用Win Nor Lin药代动力学软件处理平均药物浓度－时间数据，其分解符合一级动力学过程。

表4 不同保存条件下血液中盐酸地芬尼多分解动力学参数

3 讨 论

3.1 GC、GC/MS检测 目前国内外有关盐酸地芬尼多的检测方法有毛细管电泳法［4］、HLPC［5，6］法和 GC/MS法［7］。GC 和HPLC法定量较好，定性差，GC/MS定性定量均较好。本实验综合比较了这些方法后首先建立了血液中盐酸地芬尼多的GC和GC/MS分析方法。该方法在选定条件下盐酸地芬尼多和内标SKF525与其他杂质峰形分离良好，且灵敏度高，重现性好，同时检材用量少、操作简便、快速，适合于生物检材中盐酸地芬尼多的检测和临床药物监测。

3.2 分解动力学 毒物分解动力学研究毒物在尸体、检材和自然环境中动态变化过程或稳定性，运用动力学理论和分析技术经数学模拟来揭示此变化过程的规律性［8］。保存检材中毒物的分解动力学主要受保存条件的影响，包括温度、时间、器皿类型、防腐剂、p H值及其他等。防腐剂对生物检材中的毒物是否会产生影响与防腐剂的种类以及毒物的种类等有关［9－15］。

本实验结果显示，20℃、4℃、－20℃和20℃（1%NaF）保存60 d、120 d、180 d和240 d时，血液中盐酸地芬尼多含量显著下降为初始浓度的74.00%、65.32%、68.45%和66.85%，保存300 d时显著下降为为初始浓度的58.39%、48.27%、66.12%和31.51%，分解半衰期分别为462.32 d、238.21 d、490.56 d和168.84 d。盐酸地芬尼多在保存血液样品中可分解。各保存条件下同一时间点盐酸地芬尼多含量无统计学意义。说明保存温度和抑菌剂对其影响不大。盐酸地芬尼多中毒案件法医学鉴定中所采血样应在30 d内送检和检验。

血中平均药物浓度－时间数据拟合结果显示，保存全血中盐酸地芬尼多的分解动力学符合一级动力学过程。应用血中盐酸地芬尼多分解动力学数学模型和参数，可以推测血中药物浓度的经时变化，推断中毒死亡当时或检材采取当时尸体或检材中药物含量，指导选择最佳检材存放条件，正确分析和使用毒物分析结果。

本实验证明，盐酸地芬尼多在保存血液样品中可分解，保存温度和抑菌剂对其影响不大。因此，盐酸地芬尼多中毒案件法医学鉴定中所采血样应在30 d内送检和检验，否则可用其分解动力学方程和参数推断中毒死亡当时或检材采集当时的血药浓度。

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