扶正败毒颗粒对脓毒症大鼠急性肺损伤保护作用的实验研究*

张 韧 王丁超 苏秀平 高 翔 王 静 吴桂玲 陈晓敏

1河南省濮阳市中医院（河南濮阳457003）

2河南省中医院（河南郑州450008）

急性肺损伤（ALI）是临床上常见的急性呼吸系统功能失常，其中由感染导致的脓毒血症是引起ALI的最常见的病因。目前认为脓毒症是炎症失控导致的紊乱，是机体对微生物产物发生失控的免疫反应［1］，其中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是脓毒症发生早期的重要炎性细胞因子，大量释放则对机体造成损伤，白细胞介素-1（IL-1）可与 TNF-α 协同作用加重多器官损伤［2］。 本实验以脓毒症大鼠为研究对象，观察大鼠不同时间点的肺组织含水量、动脉血气变化、肺组织IL-1、TNF-α表达变化，探讨中药复方扶正败毒颗粒对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用。

1 材 料

1.1 实验动物 青年SD大鼠，清洁级，雌雄各半，鼠龄3～4月，体质量（300±50）g，154只。 由河南实验动物中心提供，合格证号：scxk（豫）2009-0006。

1.2 药品与仪器 扶正败毒颗粒（濮阳市中医院中药制剂室提供）；乌司他丁（广东天普生化医药股份有限公司生产，批号：国药准字 S19990050）；IL-1单克隆抗体及TNF-α单克隆抗体均由武汉博士德生物工程有限公司提供。光学显微镜（Olympus optical Co.LTD，JAPAN，型号 PM-10AD）。电子天平（上海精科天平厂，型号 JA1203）。

1.3 分组与造模 将SD大鼠按随机数字表法分为模型组、扶正败毒颗粒组、乌司他丁组及扶正败毒颗粒联合乌司他丁联合组（联合组）各36只，假手术组10只。参考文献［3-4］加以改良制备脓毒症动物模型。水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，待完全麻醉后，仰卧位固定大鼠，颈部皮肤常规备皮、消毒，于颈外侧下颌至心脏的中点作一约1cm的横切口，钝性分离皮下组织，暴露右侧颈外静脉，沿血管向近心端方向插入留置针约1cm，将导管从留置针管与颈外静脉夹孔中把心导管慢慢置入达右心房，结扎固定，导管末端经皮下隧道从颈后中央引出并固定于皮肤，管内注射125U/mL肝素0.5mL抗凝，插入置管针封闭导管。然后沿腹白线中段作3cm切口，探查取出盲肠，用4号丝线距盲端1cm处结扎，用12号针穿刺3孔，挤出少许粪便于腹腔内，回纳盲肠，分层缝合腹腔。手术过程中保持大鼠肛温（37.0±0.5）℃，保持室温（26.0±1.0）℃。

1.4 给药方法 假手术组、模型组、乌司他丁组分别于造模后第1日用生理盐水灌胃，同时扶正败毒颗粒组、联合组用扶正败毒颗粒（36.8mg/100g）灌胃（灌胃容积为1mL/100g），每日灌胃1次直至取材；乌司他丁组、联合组大鼠分别于造模后第1日腹腔内注射乌司他丁（1万U/㎏），假手术组、模型组、扶正败毒颗粒组同时用同等容积的生理盐水腹腔注射，每日1次直至取材。

1.5 标本采集与检测 （1）腹主动脉血气：测定大鼠口腔温度，并记录，取腹主动脉血2mL采用电极法进行血气测定，PaO2、PaCO2。（2）肺组织含水量：称取肺组织湿重，然后放入恒温箱（100±2℃）干燥，24h后取出，称取干重，计算肺组织含水量。计算公式：肺组织含水量=（肺湿重-肺干重）/肺湿重×100%，以%表示。（3）脏器组织IL-1，TNF-α表达：检测采用免疫组织化学SP法检测，在400倍光镜下观察，细胞膜、细胞浆呈棕色为免疫组化阳性；用Image-Pro Plus 5.1专业图像采集与分析系统采集图像，并进行半定量分析，每张切片随机选取不重叠的5个视野拍照，测定其平均吸光度及阳性细胞数，取其平均值代表各细胞因子的表达水平。（4）病理观察：取肺组织4%多聚甲醛固定，经脱水、透明、浸蜡、包埋，切成4～6μm厚的切片，常规脱蜡、脱水，苏木素-伊红（HE）染色，脱水、透明、封片。光学显微镜观察肺、肠组织病理形态学改变。

1.6 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件。计量资料采用单因素方差分析方法，数据以s）表示；组内差异比较采用单因素方差分析两组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠动脉血PaO2、PaCO2比较 见表1。与假手术组比较，模型组动脉血 PaO2显著降低，PaCO2显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，扶正败毒颗粒和乌司他丁及联合组PaO2升高，PaCO2下降，以联合7d组尤为显著（P＜0.01）；与扶正败毒颗粒通组比较，乌司他丁组无显著差异（P＞0.05），见表1。

表1 各组大鼠动脉血PaO2、PaCO2比较 （mmHg，

表1 各组大鼠动脉血PaO2、PaCO2比较 （mmHg，

与假手术组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01； 与模型组比较，◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；与扶正败毒颗粒组比较，▽P＜0.05；与联合组比较，〇P＜0.05，〇〇P＜0.01；与 2d组比较，□P＜0.05，□□P＜0.01；与 3d组比较，*P＜0.05，*P＜0.01。 下同。

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2.2 肺组织含水量变化结果 见表2。与假手术组比较，模型组大鼠肺组织含水量显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，扶正败毒颗粒和乌司他丁及联合组含水量均显著降低 （P＜0.05或0.01），与2d、3d组相比，扶正败毒颗粒和乌司他丁7d组的肺组织含水量均显著降低（P＜0.05或0.01），以联合7d组下降尤为显著（P＜0.01）。

表2 各组大鼠含水量比较（

表2 各组大鼠含水量比较（

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2.3 肺组织TNF-α、IL-1的表达变化 见表3。与假手术组比较，模型组大鼠肺组织TNF-α、IL-1表达均升高 （P＜0.05或0.01）；与模型组相比，扶正败毒颗粒和乌司他丁及联合组各时间点 TNF-α、IL-1的表达水平均显著下降（P＜0.05或 0.01），以联合7d组的尤为显著（P＜0.01）；与联合组相比，扶正败毒颗粒组和乌司他丁组TNF-α、IL-1表达水均显著升高 （P＜0.05或0.01），以 2d组尤为显著（P＜0.01）。与 2d 、3d组相比，以联合 7d组 TNF-α、IL-1 表达水平下降尤为显著（P＜0.01）。

表3 各组大鼠肺组织TNF-α、IL-1阳性细胞表达变化（IOD，

表3 各组大鼠肺组织TNF-α、IL-1阳性细胞表达变化（IOD，

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2.4 肺组织病理改变 假手术组大鼠肺组织可见肺泡大一致，肺泡壁菲薄，支气管上皮完整，管腔内无分物，支气管上皮正常，外周无炎性细胞浸润。模型2d组可见肺间质有单核细胞、淋巴细胞浸，肺组织出现散在性病灶；3d组可见病灶增大、数量多，肺泡壁广泛淋巴细胞及单核细胞浸润，有些区域可见肺泡出血，肺泡壁结构不清。7d组更为明显，肺泡腔内满布炎性渗出物、血性渗出物明显，大量上皮脱落，肺泡壁结构不清，大片的肺实变。扶正败毒颗粒组在第2、3、7日均较模型组有显著改善，病变范围、程度均较模型组明显减轻。联合7d组改善尤为显著，表现为病变范围较局限，炎细胞密度较低，肺泡腔内渗出物少，肺泡结构较模型组完整。

3 讨 论

ALI主要是因机体炎症反应失控所导致的器官损伤［5］。本组资料显示模型组大鼠肺组织炎性因子TNF-α，IL-1表达水平明显高于假手术组，表明促炎细胞因子在脓毒症大鼠急性肺损伤损伤中发挥了重要作用。TNF-α是由活化的巨噬细胞、单核细胞和T淋巴细胞产生，具有核心作用，是导致炎症介质级联反应的始发因子。一旦TNF-α被分泌出来，炎症连锁反应即被启动，促进其他细胞因子的激发释放，引起组织损害。有报道促炎症细胞因子TNF-α在感染性休克中发挥关键作用，直接导致某些脏器的损伤［6］。IL-1是另一种主要由巨噬细胞产生的促炎性细胞因子，是体内调节免疫和炎症反应的中心介质，是细胞因子网络中的关键因子，能激活多种免疫和炎症细胞：刺激单核细胞和巨噬细胞产生IL-6和TNF-α；刺激中性粒细胞释放炎症介质；诱导内皮细胞活化，与TNF-α协同作用，促进血管内皮-白细胞黏附分子的表达，趋化中性粒细胞等炎症细胞进人病变部位，增加血管内皮通透性，加重组织损伤［7-8］。所以，降低促炎细胞因子TNF-α，IL-1水平对防止ALI具有重要意义。本实验结果显示，扶正败毒颗粒能够降低组织炎性因子TNF-α，IL-1表达水平，提示扶正败毒颗粒通过降低脏器组织中炎性细胞因子TNF-α，IL-1含量，进而减轻脓毒症大鼠多器官损伤和降低死亡率。

综上所述，促炎因子TNF-α，IL-1在ALI中发挥了重要作用，扶正败毒颗粒能够降低脏器组织中TNF-α，IL-1表达水平以减轻脏器损伤；降低了肺组织的含水量，提高动脉血氧含量，对脓毒症大鼠具有确实的防护作用，为扶正败毒颗粒防治脓毒症性MODS提供了参考。

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