射干抗病毒注射液黄酮类成分的含量测定

史志刚

射干抗病毒注射液黄酮类成分的含量测定

史志刚

射干抗病毒注射液为八味中药组成的复方制剂,仅对绿原酸、次野鸢尾黄素等个别指标性成分进行含量测定,不足以保证其有效性。本文通过实验建立了对射干抗病毒注射液中四种活性成分鸢尾苷、野鸢尾苷、野鸢尾黄素和次野鸢尾黄素的含量同时进行测定的方法,实现了该制剂的多指标含量控制。

1 资料与方法

1.1 仪器与试药 仪器Agilent 1100型液相色谱仪(配有DAD检测器、四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器), ChemStation工作站(Agilent科技有限公司)。

药品与试剂乙腈(色谱纯,山东禹王实业有限公司禹城化工厂),冰乙酸(色谱纯,天津市科密欧化学试剂开发中心),无水乙醇(分析纯,康科德科技有限公司),水为去离子水。鸢尾苷(TED)、野鸢尾苷(IRD)、野鸢尾黄素(IRG)、次野鸢尾黄素(IRF)(自制,纯度≥99.3%),S1-S10为10批自制SGKBDI供试品溶液,M1-M 9市售SGKBDI供试品溶液,由西安高科陕西金方药业有限公司(批号:07030201、070312、 07030501、070314、070313、07030601)、陕西金麒麟药业有限公司(批号:07052202、07052201、07052102)提供。

1.2 溶液的制备 对照品溶液的制备 分别精密称取鸢尾苷、野鸢尾苷、野鸢尾黄素和次野鸢尾黄素的对照品适量(自制,纯度≥99.3%)置同一个25m l量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成含鸢尾苷 836μg/ml、野鸢尾苷 221μg/ ml、野鸢尾黄素19μg/ml和次野鸢尾黄素 152μg/ml的混合对照品储备液。精密量取储备液 5ml,置 10ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。

自制SGKBDI供试品溶液的制备取自制SGKBDI 1m l,置 10ml量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,用 0.45μm滤膜滤过后作自制SGKBDI供试品溶液。

市售SGKBDI供试品溶液取同批市售SGKBDI 5支混匀,用0.45μm滤膜滤过后作市售SGKBDI供试品溶液。

1.3 色谱条件 CenturySIL C18 BDS(250mm×4.6mm,5 μm)色谱柱,流动相系统见下表流速1.0ml/min,紫外检测波长265nm,柱温(30.00±0.15)℃,进样量20μL。

表1 梯度洗脱程序

2 结果

取10批自制SGKBDI和9批市售SGKBDI样品,按“1.2”项下处理制备供试品溶液,各进样分析三次,测定结果见表2。

表2 含量测定结果

直观比较发现,10批自制SGKBDI供试品溶液除S3、S5外,其余 8批样品中 4种成分的含量变化趋势相似,3批陕西金麒麟SGKBDI(M7、M 8、M 9)与这8批样品的变化趋势也较类似。6批金方SGKBDI中4种成分的含量变化趋势相似,但与其他样品有很大差别。以上结果说明两个厂家生产SGKBDI所有射干药材来源基本固定,陕西金麒麟所用射干药材用自制8批合格SGKBDI所用射干药材的这四种黄酮类成分分布比例相似,而金方药业与它们的相似度较差。

自制SGKBDI供试品溶液浓度为处方注射液浓度的4%,所以自制SGKBDI中实际鸢尾苷、野鸢尾苷、野鸢尾黄素和次野鸢尾黄素的含量应为其供试品溶液浓度的 25倍。所以自制SGKBDI中4种黄酮类成分的含量远远高于市售SGKBDI。

3 讨论

3.1 多指标定量成分的选择 射干抗病毒注射液由八味药材组方,射干为其君药,即针对主病或主证,起主要作用的药物,而黄酮类化合物又为其主要活性物质,所以本文选择射干中的鸢尾苷、野鸢尾苷、野鸢尾黄素及次野鸢尾黄素这四种重要的黄酮类物质,作为指标性成分进行同时含量测定,可以较科学、可靠、简便的控制射干抗病毒注射液的质量。

3.2 流动相的选择 射干抗病毒注射液药味较多,成分复杂,要选择一种流动相系统对其进行四种组分同时定量难度很大,本文参照射干药材中的异黄酮类成分含量测定的流动相条件,对流动相系统及梯度程序进行优化,分别考察了水(含0.05%磷酸)-乙腈、水(含1%醋酸)-乙腈(含1%醋酸)、水(含 1%醋酸)-乙腈等系统,经过多次梯度程序优化,最终确定了本文的流动相条件。

本文利用HPLC法对射干抗病毒注射液中的四种黄酮类成分进行了同时定量分析,分别测定了 10批自制制剂及 9批两个厂家市售制剂,结果表明自制射干抗病毒注射液中这四种成分的含量远远高于市售射干抗病毒注射液。本方法快速简便、准确可靠,可以用于射干抗病毒注射液的质量控制。

134001鞍山市食品药品检验所