不同产地丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量比较

孔祥文，韩杰

（1.北京中医药大学第三附属医院，北京市 100029；2北京市海淀区药品检验所，北京市 100083）

不同产地丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量比较

孔祥文1＊，韩杰2#

（1.北京中医药大学第三附属医院，北京市 100029；2北京市海淀区药品检验所，北京市 100083）

目的：建立测定不同产地丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为KromasilTMC18（250mm×4.6mm，5µm），流动相为甲醇-水（75∶25），流速为1mL·min-1，检测波长为270nm，柱温为30℃，进样量为10µL。结果：隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA进样量的线性范围分别为1.45～10.19、2.16～15.12、3.15～22.06µg（r分别为0.9998、0.9996、0.9997）；平均回收率分别为99.44%、99.48%、99.34%，RSD分别为0.2%、0.1%、0.1%（n均为6）。不同产地丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量差别较大。结论：本方法稳定、可靠、重复性好，可用于丹参的质量控制。

丹参；隐丹参酮；丹参酮Ⅰ；丹参酮ⅡA；反相高效液相色谱法；产地；含量测定

丹参是唇形科植物丹参的根及根茎，主产四川、山西、河北、江苏、安徽等省。中医理论认为丹参性味苦、微寒，归心、肝二经，具有祛瘀止痛、活血通络、清心除烦的功效。丹参的有效成分包括脂溶性成分（二萜醌类）和水溶性成分（酚酸类），均具有一定的生理活性。由于受产地、品种、气候和生态环境、炮制方法等影响，不同丹参药材所含主要活性成分差异较大。《中国药典》丹参项下脂溶性成分以丹参酮ⅡA作为质控指标[1]，而近年研究表明，丹参的脂溶性成分还包括隐丹参酮、丹参酮Ⅰ等，且含量较高、活性较强[2，3]。本试验收集了河北、山东、江苏、河南和安徽等主产地的丹参，包括不同栽培方法的丹参，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法对其中所含隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量进行测定和比较，以为丹参的选优与临床应用提供一定的参考依据[4]。

1 仪器与试药

LC-2010型HPLC仪、CLASS-VP色谱工作站、SPD-20A紫外-可见检测器（日本岛津公司）；KQ118超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BP211十万分之一电子分析天平（德国赛多利斯公司）。

隐丹参酮（批号：110852-200305，供含量测定用）、丹参酮Ⅰ（批号：0867-200205，供含量测定用）、丹参酮ⅡA（批号：110766-200417，供含量测定用）均购自中国药品生物制品检定所；丹参购于不同产地（1、2号：河北；3、4号：山东；5、6号：江苏；7、8号：河南；9、10号：安徽），均经北京市海淀区药品检验所韩杰副主任中药师鉴定为真品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：KromasilTMC18（250mm×4.6mm，5µm）；流动相：甲醇-水（75∶25）；流速：1mL·min-1；检测波长：270nm；柱温：30℃；进样量：10µL[5]。在该色谱条件下，隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的保留时间分别为15.9、17.3、27.4min[6，7]。3种成分与样品中其他组分分离良好，理论板数按隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA峰计算均＞5000；阴性对照无干扰。色谱见图1。

2.2 混合对照品溶液的制备

分别精密称取隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成每1mL含隐丹参酮85µg、丹参酮Ⅰ102µg和丹参酮ⅡA107µg的混合对照品溶液，置棕色瓶中，待用。

2.3 供试品溶液的制备

取丹参粉末（过3号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理（功率：200W，频率：40kHz）30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液2、4、6、8、10、12µL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品进样量（X，µg）对峰面积积分值（Y）进行线性回归，得3种成分的回归方程、线性范围和相关系数（r），详见表1。

表13 种成分的回归方程、线性范围和相关系数Tab1 Regression equation，linear range and relevant coefficient of 3kinds of components

2.5 精密度试验

取混合对照品溶液10µL，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果，隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的RSD分别为0.98%、1.08%、0.86%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取丹参粉末适量，按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件进样测定。结果，隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的RSD分别为1.13%、0.95%、1.25%（n＝6），表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液，室温放置，分别于0、1、2、4、8、12、24h进样，按上述色谱条件进样测定。结果，隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的RSD分别为1.05%、0.85%、1.15%（n＝7），表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8 加样回收率试验

取已知隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量的样品（批号：6174241）0.5g，共6份，分别对应加入一定量的对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表2。

2.9 样品含量测定

取不同产地的丹参适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，计算样品含量，结果见表3。

3 讨论

本试验曾参考2005年版《中国药典》（一部）丹参项下含量测定方法操作，发现供试品色谱图中不仅有丹参酮ⅡA色谱峰，而且有隐丹参酮、丹参酮Ⅰ色谱峰，故通过查阅文献，确立了本试验方法。本方法稳定、可靠、重复性好，可用于丹参药材的质量控制。

表2 加样回收率试验结果（n＝6）Tab2 Results of recovery tests（n＝6）

表3 样品含量测定结果（n＝3）Tab3 Results of content determination of samples（n＝3）

笔者对样品超声提取时间进行了考察，以甲醇为提取溶剂，分别超声提取10、20、30、40、50min。结果表明，超声提取40min，隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量已基本稳定，故确定超声提取时间为40min。

不同产地丹参中的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量差别较大，山东的野生丹参含量最高，安徽的栽培丹参含量最低，而同一地区中野生品的含量普遍高于栽培品。这与丹参的产地与加工方法有关，所以应对丹参的产地加以分类。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：52.

[2] 李晓莉，李晓蓉，王丽娟，等.RP-HPLC测定丹芎方中丹参素、阿魏酸、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量[J].中成药，2008，30（1）：77.

[3] 安 睿，王新宏，周思丽，等.HPLC测定不同产地丹参药材中脂溶性成分[J].中成药，2004，26（4）：294.

[4] 赵瑞娜，谢培山，尹卫平，等.河南栾川地区“白化”丹参的TLC和HPLC图谱分析[J].中草药，2006，37（1）：119.

[5] 韩凤梅，张 玲，陈怀侠，等.丹参脂溶性成分的ESI-MS行为及其特征图谱研究[J].中草药，2006，37（1）：122.

[6] 王 颖.复方丹参片的HPLC指纹图谱研究[J].中国药房，2010，21（23）：2162.

[7] 潘 莹.HPLC法同时测定通脉颗粒中丹参素、阿魏酸和葛根素的含量指纹图谱研究[J].中国药房，2011，22（4）：376.

Comparison of the Contents of Cryptotanshinone，Tanshinone I and TanshinoneⅡAinSalviae miltiorrhizaefrom Different Habitats

KONG Xiang-wen
（The Third Affiliated Hospital of Beijing University of TCM，Beijing 100029，China）
HAN Jie
（Beijing Haidian District Institute for Drug Control，Beijing 100083，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡAinSalviae miltiorrhizaefrom different habitats.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determination was performed on KromasilTMC18（250mm×4.6mm，5µm）column with mobile phase consisted of methanol-water（75∶25）at flow rate of 1mL·min-1.The detection wavelength was set at 270nm and the column temperature was 30℃.The injection size was 10µL.RESULTS：The linear ranges of cryptotanshinone，tanshinone Ⅰ，tanshinone ⅡAinS.miltiorrhizaewere 1.45～10.19µg（r＝0.9998），2.16～15.12µg（r＝0.9996），3.15～22.06µg（r＝0.9997），repsectively.The average recoveries were 99.44%，99.48%，99.34%，respectively.RSDs were 0.2%，0.1%，0.1%（n＝6）.There were significant differences in the contents of cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡAinS.miltiorrhizaefrom different habitats.CONCLUSION：The method is stable，reliable and reproducible for the quality control ofS.miltiorrhizae.

Salviae miltiorrhizae；Cryptotanshinone；Tanshinone Ⅰ；TanshinoneⅡA；RP-HPLC；Habitats；Content determination

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2011）19-1794-03

＊副主任药师。研究方向：临床药学。电话：010-52075316。E-mail：gongboran1991228@sina.com

#通讯作者：副主任中药师。研究方向：药品检验。电话：010-62310830

2010-12-17

2011-03-24）