紫外分光光度法测定斜脉暗罗叶和枝总三萜酸的含量

简 蓝 ， 刘冰晶 ，2， 陈光英 ，2*， 毕和平 ，2， 鲍长余 ，2， 翟明君

（1.海海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；

2.海南师范大学“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）

紫外分光光度法测定斜脉暗罗叶和枝总三萜酸的含量

简 蓝1， 刘冰晶1，2， 陈光英1，2*， 毕和平1，2， 鲍长余1，2， 翟明君1

（1.海海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；

2.海南师范大学“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）

测定斜脉暗罗叶和枝中总三萜酸的含量.以熊果酸为对照品，以质量分数5%香草醛-冰醋酸和高氯酸系统为显色剂，采用紫外分光光度法在546 nm波长处测定样品的吸光度.熊果酸对照品在20～100 g/mL范围内呈良好线性关系，回归方程为Abs=0.154 8 C+0.028 6，r=0.999 3.斜脉暗罗叶和枝中总三萜酸的含量分别为0.592%和1.436%.本法操作简便，结果稳定，重复性好，易于推广.

斜脉暗罗；三萜酸；紫外分光光度法

番荔枝科（Annonaceae）斜脉暗罗（Polyalthia plagioneura）系我国的特有植物,分布于两广和海南的部分地区[1].国内外学者从暗罗属的20多种植物中得到了多种萜类[2-3]、生物碱[4-5]等多种化合物.三萜酸具有广泛的生物活性，可以降低胆固醇、降血糖、免疫活性、抗炎、抗菌和抗病毒、抗肿瘤活性等[6].本文以熊果酸为对照品，以质量分数5%香草醛-冰醋酸和高氯酸系统为显色剂，采用紫外分光光度法测定斜脉暗罗叶和枝中总三萜酸的含量，为斜脉暗罗的开发提供科学数据.

1 仪器、试剂与材料

UV2600紫外分光光度计（上海国美科学仪器有限公司）；EYEL4OSB-2100旋转蒸发仪（日本东京理化）；索式提取器等.

质量分数95%乙醇，无水乙醇，香草醛，高氯酸，冰醋酸等均为国产分析纯；熊果酸对照品购自上海顺勃生物工程有限公司（纯度大于98.0%）.

斜脉暗罗采自海南省昌江县，经霸王岭自然保护区陈庆工程师鉴定为番荔枝科暗罗属植物Poly⁃althia plagioneura，标本现存于海南师范大学省部共建-热带药用植物化学教育部重点实验室.

2 实验部分

参照文献[7-10]的方法并做改进.

2.1 对照品溶液制备

准确称取105℃干燥至恒重的熊果酸对照品20.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.400 g/L溶液，精确移取溶液2.5 mL，定容至100 mL，得浓度为0.01 g/L的对照品溶液.

2.2 供试品溶液制备

将粉碎过的斜脉暗罗叶和枝置于50℃烘箱干燥24 h，各准确称取2.0 g，用无水乙醇浸泡2 h后，用索式提取器提取8 h，提取液用TLC测定，至渣液与浓H2SO4反应不显紫色为止.回收乙醇后，提取液放冷至室温，用无水乙醇定容至100 mL，摇匀.分别准确吸取叶和枝提取液2.5 mL和5.0 mL于100 mL容量瓶中，再用无水乙醇定容，摇匀，制得供试品溶液.

2.3 测定波长选择

精确量取对照品溶液5.0 mL，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸溶液0.8mL显色后，进行全波长扫描，随行空白对照.结果表明，对照品溶液在546 nm处有最大吸收峰，试验结果见图1，故选择546 nm作为样品测定波长.

2.4 标准曲线绘制

准确吸取对照品溶液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 mL分别置于10 mL容量瓶中，沸水浴挥去无水乙醇，冷却后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸溶液0.8 mL，将容量瓶放人70℃水浴中加热15 min，冷却至室温，用冰醋酸定容到刻度，摇匀.在546 nm波长处测定吸光度值，随行空白对照.以熊果酸含量（μg/mL）为横坐标，吸光度值为纵坐标，作图得到标准曲线（见图2），标准曲线方程为：A=0.1548C+0.0286，式中A为吸光度值，C为浓度（μg/mL），相关系数r=0.9993，线性范围为0.2～1.6 μg/mL.

图1 对照品紫外吸收图Fig.1UV absorption spectrum of reference substations

图2 标准曲线图Fig.2Standard curve

2.5 稳定性实验

取对照品和样品溶液各5.0 mL，按照2.4项下方法进行，每隔15 min测定一次，结果见表1，RSD值较小（RSD=2.37%、1.27%、1.75%），表明本法在1.5 h内基本稳定.

2.6 精密度实验

取同一批样品液，进行5次平行实验，测定含量，结果见表2,叶和枝的分别为RSD=0.85%（n=5）和RSD=1.57%（n=5），精密度良好.

2.7 加样回收实验

准确量取5份已知含量的斜脉暗罗叶和枝提取液各5.0 mL，准确加入一定量的的熊果酸对照品，余下部分按2.4项下方法操作，实验结果见表3.实验表明，叶提取物平均回收率100.57%，RSD=1.50%（n=5），枝提取物平均回收率100.76%，RSD=1.03%（n=5）.

2.8 样品含量测定

准确量取各3份斜脉暗罗叶和枝的样品溶液5.0 mL于50.0 mL容量瓶中，沸水浴挥去无水乙醇，冷却后加入5%香草醛-冰醋酸溶液1.0 mL，高氯酸4.0 mL，容量瓶放人70℃水浴中加热15 min，冷却至室温，用冰醋酸定容，摇匀，余下部分按2.4项方法操作.实验和计算结果见表4，斜脉暗罗叶中总三萜酸含量为1.436%，RSD=0.42%（n=3），枝中总三萜含量为0.592%，RSD=1.88%（n=3）.

表1 稳定性实验Tab.1 Stability test

表2 精密度实验Tab.2 Precision test

表3 加样回收实验Tab.3Recovery test

表4 样品测量结果Tab.4Determination results of samples

3 讨论

测量总三萜酸类时，文献报道[8-10]显色系统香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液的是不同的，本文对质量分数为5%的香草醛-冰醋酸溶液与高氯酸溶液的比例进行了调整，结果表明，本实验显色稳定，重复性好.

试验结果表明，在显色系统香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液条件下，用紫外光分光光度法测定斜脉暗罗中的总三萜酸有良好的线性关系，干扰少，方法简便，测定结果准确可靠,是测定斜脉暗罗总三萜酸类化合物的较佳方法.

[1]蒋英,李秉滔,李延辉.中国植物志,第三十卷:第二分册[M].北京:科学出版社,1979:170.

[2]Choudhury M H,Mohammad A.Hossain Andmoham⁃mad A.Rashid,Clerodane Diterpenoids from Polyalthia Iongifolia var.Pendulla[J].Biochemical Systematics and Ecology,1995,23(3):331-332.

[3]Jossang A,Leboeuf M,Cave A,et al.Alcaloides desan⁃nonacees,L:A lcalo ides des Polyalthia cauliflora[J].J Nat Prod,1984,47:504-513.

[4]Wu Y C,Duh C Y,Wang S K,et al.Two new natural azafluorene alkaloids and a cytotoxic aporphine alkaloid from Polyalthia longifloria[J].J Nat Prod,1990,53:1327-1331.

[5]郑祥慈,杨仁洲,徐任生,等.斜脉暗罗素甲—具有C5-OH的单四氢呋喃环型番荔枝内酯[J].植物学报,1994,36(7):557-560.

[6]姚新生,吴立军.天然药物化学[M].4版.北京:人民卫生出版社,2003,306.25(1):4.

[7]陈彦君,程素霞,龙跃,等.中草药雀儿舌头中总三萜酸含量的紫外分光光度法测定[J].郑州大学学报:医学版,2008,43(3):602-603.

[8]张雁冰,王克让,刘宏民.马桑叶中总三萜酸的含量测定[J].时珍国医国药,2006,17(4):529-530.

[9]周巧霞,张经硕,顾明,等.测定山楂及提取物总三萜酸的含量[J].中国野生动植物资源,2004,23(5):43-44.

[10]蔡亚玲,阮金兰,苏群,等.紫背鼠尾草中总三萜酸的含量测定[J].中药材,2008,31(5):692-693.

Ultraviolet Spectrophotometric Determination of Tritepenoidic Acid in the Leaves and Stems of Polyalthia Plagioneura

JIAN Lan1，LIU Bingjing1，2，CHEN Guangying1，2*，BI Heping1，2，BAO Changyu1，2，ZHAI Mingjun1
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Hainan Normal University，Haikou571158，China）

Under the experimental conditions including ursolic acid as the reference,5%vanillin-acetic acid and per⁃chloric acid as color system,the content of triterpenoidic acid in the leaves and stems ofPolyalthia plagioneurawas de⁃termined by ultraviolet spectrophotometric method at 546 nm.The calibration curve was linear（r=0.999 3）in the range of 0.2～1.6μg/mL，and the curve was Abs=0.154 8 C+0.028 6，the content was 1.436%and 0.592%.The result was sta⁃ble，and has good repeatability.This method was conveniently to operate and easy for application.

Polyalthia plagioneura；Tritepenoidic acid ；Ultraviolet spectrophotometric method

R 284.2

A

1674-4942（2010）04-0410-03

2010-05-21

海南省高校硕士研究生创新科研课题（Hxwsy2009-10）；国家大学生创新实验项目（101165815）

*通讯作者

毕和平