碱性成纤维细胞生长因子对小鼠顺铂肾损伤的保护作用

黄巨恩，谢 伟，李校堃

(1.广西医科大学护理学院，广西南宁 530021;2.温州医学院生物与天然药物研究院，浙江温州 325027)

顺铂(cDDP)能进入癌细胞的细胞核，干扰DNA的复制，是一种广谱、有效的抗癌药物，其疗效与用药剂量成正比，但cDDP的严重肾毒性是限制临床应用的主要因素，其肾毒性机制仍不十分清楚。本研究是在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)对顺铂所致的肾小管上皮细胞损伤具有保护作用的基础上［1］，进一步开展在体研究。

1 材料与方法

1.1 动物模型及分组处理 将32只♂昆明小鼠随机分为空白对照组、顺铂组、bFGF 1组、bFGF 2组，每组8只。各组分别处理如下:① 顺铂组:按10 mg·kg-1顺铂腹腔注射1次;② bFGF 1组、bFGF 2组:腹腔注射顺铂1次，每天分别以12 μg·kg-1和24 μg·kg-1bFGF 腹腔注射 1 次，连续 5 d;③空白对照组:腹腔注射等量NS。

1.2 病理学观察 左侧肾脏前部相同部位取2 mm3的肾组织，制作石蜡切片，HE染色，光镜观察。

1.3 血清学检查 所有的动物在经过处理后的5 d采血，检测血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)浓度。

1.4 生化和酶学检测 取一侧肾脏做组织匀浆，检测MDA、NO 含量，GSH-Px、SOD 活性。

2 结果

2.1 光镜观察 顺铂组与空白对照组比较，肾小管上皮细胞出现局灶性水肿、变性坏死，有些肾小管中可见管型，肾小球形态无明显改变;而bFGF组的肾小管上皮细胞仅出现轻微肿胀，变性坏死较少，肾小管形态良好。

2.2 血清学检查 顺铂肾损伤时，血中BUN、Scr含量明显升高;bFGF可使之下降，但与空白对照组比较，两项指标差异仍有显著性，说明肾功能有所恢复，但未达到正常对照组水平。bFGF 1组与bFGF 2组比较，差异无显著性(Tab 1)。

Tab 1 BUN，Scr concentrations of serum in all groups ± s，n=8)

Tab 1 BUN，Scr concentrations of serum in all groups ± s，n=8)

*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs control group;▲P ＜0.05 vs cDDP group

Group BUN/mmol·L-1 Scr/μmol·L -1 Control 5.75±0.84 10.50±3.89 cDDP 15.81±4.13＊＊ 22.63±5.34＊＊bFGF 1 10.66±3.91＊▲ 16.13±3.04＊▲bFGF 2 11.69±5.03＊▲ 17.50±5.98＊▲

2.3 肾组织的生化和酶学检测 顺铂肾损伤后，肾组织内NO、MDA含量明显升高，GSH-Px、SOD活性明显降低;bFGF可使肾组织内NO、MDA含量降低，而GSH-Px和SOD活性升高;bFGF 1组与bFGF 2组之间比较，差异无显著性(Tab 2)。

Tab 2 NO，MDA，GSH-Px，SOD levels of renal tissues in all groups( ± s，n=8)

Tab 2 NO，MDA，GSH-Px，SOD levels of renal tissues in all groups( ± s，n=8)

*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs control group;▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01 vs cDDP group

Group NO/μmol·g-1Pro MDA/μmol·g-1Pro GSH-Px/U·mg-1Pro SOD/U·mg-1Pro Control 0.77±0.36 83.00±2.91 272.69±32.82 35.62±1.99 cDDP 1.87±0.51＊＊ 145.24±3.96＊＊ 180.02±25.59＊＊ 19.68±5.56＊＊bFGF 1 1.28±0.38＊▲ 120.65±6.47＊＊▲▲ 227.33±51.94＊▲ 26.77±6.09＊▲bFGF 2 1.26±0.45＊▲▲ 117.52±5.24＊＊▲▲ 221.22±40.05＊▲ 27.52±8.40＊▲

3 讨论

本研究中，我们利用cDDP建立小鼠顺铂肾损伤的动物模型，一次性注射10 mg·kg-1顺铂，于实验5 d血中BUN、Scr升高，均高于空白对照组水平(P＜0.01);病理切片显示小鼠肾小管呈局灶性水肿、变性、坏死;GSH-Px和SOD活性降低，而NO和MDA水平升高，差异有显著性(P＜0.05)，复制动物模型成功。自由基损伤以及细胞酶活性的改变在cDDP等肾损伤中发挥重要作用，而bFGF可拮抗顺铂肾损伤所引起的GSH-Px，SOD酶活性下降［2-3］。bFGF组的NO、MDA水平比模型组下降(P＜0.05或0.01)，但比空白对照组高，也就是说，NO、MDA水平没有能够恢复到正常对照组水平。其原因可能因为自由基有多种形式，而GSH-Px、SOD等抗氧化酶可能只能对抗其中的一些自由基形式(如羟自由基、超氧阴离子);NO与超氧化物阴离子反应的速率比SOD清除超氧化物阴离子的速率快得多，故NO可与SOD竞争超氧化物阴离子生成超氧亚硝基阴离子，超氧亚硝基阴离子又通过使蛋白质中的酪氨酸硝基化，抑制SOD活性，造成恶性循环。所以，虽然bFGF使GSH-Px、SOD等酶的活性有所恢复，但仍不能完全阻断自由基产生的通路，使NO、MDA完全被清除［1，4］。

［1］刘丽敏，刘华钢，黄巨恩，等.酸性成纤维细胞生长因子对顺铂肾损害保护作用的实验研究［J］.解剖学研究，2006，28(4):243-6.

［1］Liu L M，Liu H G，Huang J E，et al.Protective effects of aFGF on renal tubular epithelial cells damaged by cisplatin in vitro［J］.Anat Res，2006，28(4):243-6.

［2］黄巨恩，王慧杰，刘华钢，等.酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用［J］.中国药理学通报，2007，23(11):2455-8.

［2］Huang J E，Wang H J，Liu H G，et al.Protective effects of aFGF on gentamicin-induced injuries of rats′renal tubular epithelial cells in vitro［J］.Chin Pharmacol Bull，2007，23(11):2455-8.

［3］刘慰华，黄河清，邓艳辉，等.黄连素对糖尿病肾损伤大鼠肾功能、氧化应激、肾脏醛糖还原酶的影响［J］.中国药理学通报，2008，24(7):955-9.

［3］Liu W H，Huang H Q，Deng Y H，et al.Effects of berberine on renal function，oxidative stress and renal aldose reductase in rats with diabetic nephropathy［J］.Chin Pharmacol Bull，2008，24(7):955-9.

［4］洪炳哲，王丽萍，高立建，等.bFGF激活tyrosine kinase/PI3K/PLCγ增加血管内皮细胞［Mg2+］i的研究［J］.中国药理学通报，2008，24(1):50-3.

［4］Hong B Z，Wang L P，Gao L J，et al.bFGF increases intracellular free［Mg2+］i by tyrosine kinase/PI3K/PLCγ in HUVECs［J］.Chin Pharmacol Bull，2008，24(1):50-3.