β-纤维蛋白原-448G/A 基因多态性与脑梗死的关系

廖远高 胡海冰 杨期明

纤维蛋白原(Fibrinogen, Fg)在凝血、止血过程中起到重要的作用,近些年的研究结果表明高水平的Fg 是动脉血栓性疾病的独立危险因子[1,2]。Fg 是由各两条α、β、γ多肽链构成的对称二聚体,这些多肽链分别由纤维蛋白原α链基因、纤维蛋白原β 链基因和纤维蛋白原γ链基因三个基因编码,对于β-纤维蛋白原-448G/A 基因突变能否引起血浆Fg 水平的改变,能否导致脑梗死已经有学者进行了研究,但是数量不多且结果不一。

1 资料与方法

1.1 研究对象

脑梗死组(Cerebral infarction, CI)病例为2009年6 月～2009 年12 月在郴州市第一人民医院神经内科住院患者,共81 例,其中男53 例,女28 例,平均年龄(57.99±10.56)岁,所有脑梗死病例均符合全国第四届脑血管病会议的诊断标准, 并经头部CT 或MRI 证实,而且入组时的病程小于7 d,同时该组病例排除有潜在的心源性栓子、严重肝肾功能不全、风湿免疫性疾病、肿瘤、近期感染及慢性炎症患者。对照组(Control, Con)为同期健康体检者,共76 例,其中男42 例,女34 例,平均年龄(54.70±11.37)岁,该组病例既往无血栓性疾病史,入组前1个月内无外伤、感染及药物使用等,且C T 或MRI证实无颅内血栓性疾病。两组病例性别、年龄基本匹配(P＞0.05)。

1.2 血浆Fg 浓度和生化指标的测定

清晨空腹抽取静脉血3 ml 在郴州市第一人民医院化验室由CA-1500 全自动血凝仪分析完成。

1.3 β-纤维蛋白原-448G/A 基因多态性检测

清晨空腹抽取静脉血1 ml, 0.5 M EDTA 0.3 ml 抗凝,摇匀放入4 ℃冰箱备用,应用上海生工生物工程技术服务有限公司生产的UNIQ-10 柱式小剂量血液基因组抽提试剂盒抽提全血基因组DNA。

配制2%琼脂糖凝胶, 取扩增产物5 μl 及Marker 进行电泳,设定电压150 V,电流120 mA,时间40 min,在紫外灯光下观察可见扩增片段大小为148 bp。

在0.5 ml EP 管中加限制性内切酶和扩增产物进行37 ℃12 h 的酶切反应。配制2%琼脂糖凝胶,取酶切产物进行点用分析,设电压150 V,电流120 mA,时间60 min,电泳后紫外灯光下观察酶切结果,呈三种基因型,纯合突变型A/A,为148 bp 条带,杂合突变型G/A,包括30 bp、118 bp 和148 bp三个条带,野生型G/G,包括30 bp 和118 bp 两个条带。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 脑梗死组和对照组生化指标的比较

脑梗死组的甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),两组的谷丙转氨酶(A LT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、空腹血糖(fBS)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)水平差异无统计学意义(P＞0.05)(表1)。

2.2 脑梗死组与对照组血浆纤维蛋白原水平的比较

表1 脑梗死组和对照组生化指标的比较(±s)

表1 脑梗死组和对照组生化指标的比较(±s)

生化指标 脑梗死组 对照组 t P ALT(μ/L) 43.49±38.60 34.39±26.29 1.736 ＞0.05 BUN(mmol/L) 7.06±3.05 6.62±2.07 1.063 ＞0.05 Cr(μmol/L) 108.29±32.13 105.30±40.30 0.512 ＞0.05 fBS(mmol/ L) 5.48±1.46 5.13±0.87 1.838 ＞0.05 TG(mm ol/L) 1.26±0.70 1.13±0.52 1.326 ＞0.05 TC(mmol/ L) 4.62±1.02 4.29±0.76 2.308 ＜0.05 HDL-C(mmol/L) 1.12±0.31 1.17±0.26 -1.097 ＞0.05 LDL-C(mmol/ L) 2.52±0.59 2.23±0.52 3.272 ＜0.05

经Levene 检验,F=0.351,P=0.554,认为两组方差齐性,经独立样本的t检验,得t=-3.473,P＜0.01,认为两组血浆纤维蛋白原水平均值差异有统计学意义(表2)。

表2 2 组血浆纤维蛋白原水平的比较(±s)

表2 2 组血浆纤维蛋白原水平的比较(±s)

注:与对照组比较,t=-3.478, *P ＜0.01

组别 纤维蛋白原(g/ L)脑梗死组 4.435 1±0.995 59*对照组 3.866 7±1.051 73

2.3 β-纤维蛋白原-448G/A 基因型及A 等位基因分布

根据FGB-448G/A 基因频率,按Hardy-Weinberg 平衡定律对研究总人群进行了平衡检验(P＞0.05),说明本研究总人群基因频率能代表群体的基因分布。脑梗死组A/A 基因型及A 等位基因频率均低于对照组,但差异均无统计学意义(P＞0.05)(表3)。

表3 β-纤维蛋白原-448G/A 基因型分布与各等位基因频率的比较(例, %)

3 讨 论

Spada RS 等研究认为血浆Fg 增高是缺血性心脑血管疾病发生和发展的一个独立危险因素[4],Bots 等在欧洲的一项脑卒中发病率与危险因素病例对照研究中发现脑卒中的发病率随着血浆Fg 水平的升高而增加[5]。Napolin 等发现脑梗死患者血浆Fg 增高与脑卒中神经功能缺损评分量表的卒中严重程度及脑梗死的复发相关[6]。本研究发现脑硬死患者血浆Fg 浓度明显高于对照组,差异有统计学意义,与国内外研究结果一致,进一步表明血浆Fg 浓度增高是脑梗死发生的危险因素之一。Velcheva 等的研究表明高血浆Fg 浓度可增加血粘度,并导致血压升高,并间接激活凝血因子[7],这可能是高浓度Fg 增加脑梗死的原因。

Fg 是由两组完全对称的分子构成,每一组分子包含3 条多肽链,其核心链纤维蛋白原β 链的mRNA 的合成被认为是整个分子合成的限速步骤[8]。其编码基因有10 余个突变位点,β-448G/A 为主要突变之一。Zhai 等研究发现A-455 基因突变可能是肺动脉栓塞症发病的危险因素[9]。Yuan 等研究了FGB 基因的多个位点突变,发现仅Bcl-1 G/A 突变与脑梗死有关[10]。但是到目前为止有关FGB-448G/A 基因多态性与脑梗死的相关性研究仍然没有明确的结论。

本研究发现β-纤维蛋白原-448G/A 基因多态性有三种基因型:野生突变型(G/G)、杂合突变型(G/A)和纯合突变型(A/A)。脑梗死组的G/G 型、G/A 型、A/A 型的频 率分别为60%、38%、2%,暴露于已突变A 等位基因的频率为20.4%;与对照组的差异无统计学意义,表明FGB 基因在448 位点发生的突变与脑梗死没有明显关系。推测其原因,可能β-纤维蛋白原G448A 突变是与多种其他原因协同作用影响脑梗死发生的,故而更大样本、更多基因位点的研究成为必要。

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2 Gerald L, Jean MB, Irene J, et al.Creactive protein, interleukin-6, and fibrinogen as predictors of coronary heart disease.Arteroscler Thromb Vasc Biol, 2003, 23(1):256-261.

3 傅 毅,魏 新,倪培华,等.缺血性脑卒中与血浆纤维蛋白原的相关性分析.中华内科杂志,2005,44(12):914-917.

4 Spada RS, Toscano G, Chiaren AZAS, et al.Ischemic stroke and fib-rinogen in the elderly.Arch Gemntol Gefiatr Suppl, 2004, 2(9):403-406.

5 Bots ML, E lw ood PC, Salonen JT, et al.Level of fibrinogen and risk of fatal and non-fatal stroke.E UROSTROKE:a collaborative study among research centres in Europe.Journal of Epidemiology and Community H ealth, 2002, 56(Suppl 1):114-118.

6 Di Napolin, Papa F, Bocol V.Prognostic influence of increased greactive prote in and fibrinogen level in ischemic stroke.Stroke,2001, 32(1):133-136.

7 Irena Velcheva, Nadia Antonova, E katerina Titianova, et al.H emotheologieal paraeters in correlation w ith the risk factors for earotid atheroselerosis.Clinical H emotheology and Mieroeireulation, 2006, 35(1-2):195-198.

8 Roy SN, Mukhopadhy ay G.Regulation of fibrinogen assembly:transfection of H ep G2 cells w ith B beta Cdna specifically enhances synthesis of the three component chains of fibrinogen.J Bio Chem, 1990, 265(11):6389-6393.

9 Zhai ZG, Wang C, Yang YH, et al.Study on the relationship between polymorphisms of susceptible genes in coagulation pathw ay related to pulmonary thromboembolism in C hinese Han population.Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi JT, 2006, 27(2):165-169.

10 Yuan XD, Wang SJ, Xu YR, et al.Relationship betw een m ultilocus fibrinogen polymorphisms and fibrinogen concentration,molecular reactivity and cerebral infarction.Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi, 2009, 30(9):582-587.