高效液相色谱法对绿茶中茶多酚含量的测定

侯冬岩，回瑞华，李铁纯，刁全平，魏 威，刘晓媛

(鞍山师范学院化学系，辽宁 鞍山 114007)

高效液相色谱法对绿茶中茶多酚含量的测定

侯冬岩，回瑞华，李铁纯，刁全平，魏 威，刘晓媛

(鞍山师范学院化学系，辽宁 鞍山 114007)

采用高效液相色谱法测定绿茶中茶多酚的含量。在色谱柱为Kromasil C18、流动相为乙酸:甲醇:N,N-二甲基甲酰胺:水=1:1:40:58(V/V)、色谱柱温30℃、进样量10μL、检测器为紫外检测器、检测波长280.0nm的色谱条件下对绿茶中茶多酚含量进行测定。结果表明：回归方程为Y=1×10-7X－0.0036(r=0.9995)，方法变异系数小于3.04%，回收率为99.16%～100.60%；6种绿茶样品茶多酚含量为62.07～110.86mg/g，说明产地不同，绿茶中茶多酚的含量相差较大。本方法简便、准确，适合绿茶中茶多酚含量的分析。

绿茶；高效液相色谱法；茶多酚；测定

绿茶作为不发酵茶，保留了茶叶最原有的化学成分；绿茶主要含有茶多酚、咖啡碱、糖类、黄酮类化合物等[1-5]。茶多酚又叫茶单宁、茶鞣质，是茶叶中酚类及其衍生物的总称。茶多酚具有很强的抗氧化能力，其抗氧化能力可达L-抗坏血酸的100倍。现代科学研究认为人体衰老的原因在于人体的细胞在代谢过程中连续不断地产生具有高度活性的自由基和细胞自身的抗氧化酶及超氧化物歧化酶(SOD)不断消除作用的失衡，使自由基浓度过剩，茶多酚具有很强的清除人体自由基的作用，是极强的消除有害自由基的天然物质[6-16]。绿茶中含有丰富的茶多酚，通常采用国标法即酒石酸亚铁比色法进行测定茶叶中茶多酚的含量，但酒石酸亚铁比色法存在操作步骤繁琐、费时等不足。本实验采用高效液相色谱法测定绿茶中茶多酚的含量，测得的茶多酚含量与国标法测得的茶多酚含量比较基本一致。高效液相色谱法测定绿茶中茶多酚含量，具有灵敏度高、分

析时间短、操作简单等优点，为绿茶中茶多酚含量测定方法的建立提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

绿茶样品(浙江龙井、福建绿螺、阳羡雪芽、西乡特炒、广东绿茶、极峰绿茶) 辽宁生物技术科学股份有限公司。甲醇(色谱纯)、冰乙酸、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺均为分析纯；茶多酚标准品(绿茶提取茶多酚混合物) 上海衍胜实业集团；二次蒸馏水。

Waters 1525-2996-tcm 液相色谱仪 美国Waters公司；TU036紫外-可见分光光度计 Varian公司；KQ-250B型超声波清洗器 昆山市超声波仪器有限公司；Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱 瑞典Akzo Nobel公司。

1.2 方法

1.2.1 样品前处理

将绿茶样品粉碎，过0.45mm筛，得绿茶样品粉末备用。

1.2.2 样品储备液的制备

分别称取粉碎的绿茶样品1.00g于50mL锥形瓶中，加入10mL沸水，加塞。在沸水浴中浸提20min，然后立即减压抽滤，滤渣重复提取一次，合并滤液。滤液用氯仿萃取(氯仿:茶汤=1:1)3次。取氯仿萃取后的水层用乙酸乙酯萃取(乙酸乙酯:水=1:1)3次，乙酸乙酯层在55℃减压浓缩，浓缩液定容到50mL容量瓶中，得样品储备液，待用。

1.2.3 检测波长的选择

将质量浓度0.8mg/mL茶多酚标准溶液，用紫外-可见光谱仪从波长210～400nm扫描。在波长为280.0nm时茶多酚的吸光度最大，因此选择280.0nm作为检测波长。

1.2.4 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18；流动相：乙酸:甲醇:N,N-二甲基甲酰胺:水=1:1:40:58(V/V)；色谱柱温：30℃；进样量：10μL；检测器：紫外检测器；检测波长：280.0nm。

2 结果与分析

2.1 茶多酚标准品和样品色谱图

图1 茶多酚标准品的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of tea polyphenol standard

图2 浙江龙井茶的HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Zhejiang Longjing tea

采用1.2.4节高压液相色谱条件测得茶多酚标准品与样品的色谱图如图1～7所示。由图1～7可知，可以采用HPLC法对绿茶中茶多酚进行定量分析。

图3 福建绿螺茶的HPLC色谱图Fig.3 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Fujian Lvluo tea

图4 阳羡雪芽茶的HPLC色谱图Fig.4 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Yangxian Xueya tea

图5 西乡特炒茶的HPLC色谱图Fig.5 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Xixiang Techao tea

图6 广东绿茶的HPLC色谱图Fig.6 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Guangdong green tea

图7 极峰绿茶的HPLC色谱图Fig.7 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Jifeng green tea

2.2 标准曲线的绘制

准确称取茶多酚的标准品20mg于50mL的小烧杯中，用少量乙酸乙酯溶解后，最后定容到25mL容量瓶中，作为茶多酚标准储备液。分别精确移取0.7、1.3、1.9、2.5、3.1、3.7mL于10mL容量瓶中，然后用乙酸乙酯定容。分别通过0.45μm滤膜过滤。进样量为10μL，以积分峰面积为横坐标，茶多酚质量浓度为纵坐标，绘制标准曲线。标准曲线回归方程为Y=1×10-7X－0.0036，相关系数r=0.9995，说明茶多酚在0.0560～0.296mg/mL范围内，峰面积与质量浓度呈良好线性关系，可按标准曲线法进行定量分析。

2.3 样品中茶多酚含量的测定

从1.2.2节储备液中吸取0.1mL，稀释到50mL，在1.2.4节的色谱条件下每个样品进样3次，求出3次的积分峰面积的平均值，计算各样品的茶多酚含量，结果见表1。6种绿茶样品茶多酚含量为62.07～110.86mg/g。

表1 样品中茶多酚的含量Table 1 Content of polyphenols in green teas

2.4 精密度实验

将1.2.2节的样品储备液稀释成6个不同质量浓度的测定液，每个测定液在同一色谱条件下进样9次，计算该方法的精密度，结果如表2所示。

表2 方法精密度Table 2 Precision test results of the method

2.5 回收率实验

按照1.2.2节配制样品液，添加3个质量浓度水平(0.02、0.04、0.06mg/mL)的标准液，上机测定，测定该方法的回收率如表3所示。

表3 方法回收率Table 3 Recovery of the method

3 结 论

采用高效液相色谱法测定6种绿茶样品的茶多酚的含量。紫外光谱选择280.0nm作为检测波长。该方法的变异系数小于3.04%，回收率为99.16%～100.6%。测得的茶多酚含量与国标法测得的茶多酚含量比较基本一致。该法准确、灵敏、快速、简便、专属性强，可作为绿茶中茶多酚含量的定量测定方法。6种绿茶样品茶多酚含量为62.07～110.86mg/g，说明产地不同，绿茶中茶多酚的含量相差较大。

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HPLC Determination of Polyphenols in Green Tea

HOU Dong-yan，HUI Rui-hua，LI Tie-chun，DIAO Quan-ping，WEI Wei，LIU Xiao-yuan
(Department of Chemistry, Anshan Normal University, Anshan 114007, China)

The polyphenol contents in green tea were determined by high performance liquid chromatography method, using the mobile phase consisting of acetic acid, methyl alcohol, N,N- dimethylformamide and warter (1:1:40:58, V/V). The column temperature was 30 ℃, and the detection wavelength was 280.0 nm. The regression equation obtained was Y=1×10-7X－0.0036(r =0.9995). The coefficient of variation was less than 3.04%, and the recovery was 99.16%－100.60%. The result indicates that the proposed method is simple , accurate and feasible for determination of polyphenols in the green teas.

green tea；HPLC；polyphenols；determination

O657.32

A

1002-6630(2010)24-0305-03

2010-06-10

辽宁省教育厅科学技术基金项目 (20331079)

侯冬岩(1962—)，男，教授，硕士，主要从事天然功能食品科学研究。E-mail：houdongyan2010@163.com