小柴胡汤配方颗粒质量标准研究

石志军，徐以亮

（江阴天江药业有限公司，江苏 江阴 214434）

小柴胡汤配方颗粒质量标准研究

石志军*，徐以亮

（江阴天江药业有限公司，江苏 江阴 214434）

目的：对小柴胡汤配方颗粒进行质量标准研究。方法：采用薄层色谱法对小柴胡汤配方颗粒进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对黄芩中的黄芩苷进行含量测定。结果：该方法黄芩苷的线性范围为0.248 8～1.244 0μg，平均回收率为99.29%（n＝6），RSD＝0.53%。结论：方法可行、重复性好，能有效地控制小柴胡汤配方颗粒的质量。

小柴胡汤；配方颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准

小柴胡汤出自汉朝张仲景的《伤寒杂病论》，被称为少阳枢机之剂，和解表里之总方［1］，临床功效卓著，为历代医家所推崇。由柴胡、黄芩、人参、姜半夏、炙甘草、生姜、大枣等7味中药组成，具有和解少阳之功效，用于伤寒少阳证，寒热往来，胸胁苦满；妇人伤寒，热入血室。小柴胡汤配方颗粒为上述药味经现代制剂技术制成的颗粒剂。有关小柴胡汤的临床应用报道比较多，而其质量控制方面的报道比较少［2，3］。为有效控制该制剂的内在质量，确保临床用药安全有效，本文参考有关文献［4］，应用薄层色谱法建立了柴胡的薄层鉴别方法，采用高效液相色谱法对黄芩中主要有效成分黄芩苷进行了含量测定。实验证明，该法简便快捷，专属性强，结果满意，可作为该制剂的内控质量标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1200 Series（美国Agilent公司），AT-330柱温箱（天津奥特赛恩斯科学仪器有限公司），超声清洗机（无锡超声电子设备厂），十万分之一电子天平（瑞士梅特勒公司）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

1.2 试药

硅胶G（青岛海洋化工厂），黄芩苷对照品（批号110715-200514，中国药品生物制品检定所，供含量测定用），甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

小柴胡汤配方颗粒（批号200906，200908，200911）均由江阴天江药业有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 柴胡的薄层鉴别［4］

取本品3g，研细，加甲醇30mL，超声处理30m in，滤过，滤液蒸干，残渣加水20m L使溶解，用水饱和的正丁醇提取两次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次40m L，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取不含柴胡的对照样品3g，同法制成阴性对照溶液。再取柴胡对照药材3g，加水100m L煎煮30min，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加甲醇30mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-乙醇-水（8∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，60℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性对照溶液在同一位置则无斑点干扰。见图1。

图1 小柴胡汤的TLC图

2.2 黄芩苷含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Lichrospher C18（江苏汉邦科技有限公司，200mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-磷酸溶液（47∶53∶0.2）［4］；检测波长：280nm；柱温：35℃；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2 000。

2.2.2 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品约12mg，精密称定，置100mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（0.124 4mg·mL－1）。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品细粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性对照品溶液的制备 取缺黄芩的阴性对照样品约0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法，同法制成阴性对照品溶液。

2.2.5 干扰试验 照上述色谱条件，分别取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各5μL，分别注入色谱仪。供试品色谱图中，在与对照品色谱图相应的位置上，显示相同保留时间的色谱峰，而阴性溶液在此保留时间无干扰。见图2。

图2 小柴胡汤颗粒HPLC图

2.2.6 线性关系考察 分别精密吸取黄芩苷对照品溶液（0.124 4mg·mL－1）2，4，6，8，10mL置10mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，配成浓度分别为0.024 88，0.049 76，0.074 64，0.099 52，0.124 4mg·mL－1系列对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，黄芩苷浓度（X）为横坐标，得回归方程Y＝33 269.06X＋18.53，r＝0.999 9。结果表明黄芩苷进样量在0.248 8～1.244 0μg与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验 分别精密吸取黄芩苷对照品溶液（0.124 4mg·mL－1）各5μL，按上述色谱条件重复进样6次，测定黄芩苷峰面积积分值，计算其RSD＝0.98%，表明仪器精密度良好。

2.2.8 重现性试验 取同一批小柴胡汤配方颗粒样品，平行6份，分别按供试品溶液的制备方法制备，分别进样5μL，测定样品中黄芩苷的含量，结果小柴胡汤颗粒中黄芩苷的平均含量为20.30mg·g－1，RSD＝1.05%。

2.2.9 稳定性试验 取小柴胡汤颗粒（批号为200911）的供试品溶液，分别于0，1，2，4，8h进样5μL，测定黄芩苷的峰面积，计算其RSD＝0.61%，结果表明样品溶液在8h内稳定。

2.2.10 回收率试验 取已知含量的样品（批号200811）0.5g，精密称定，分别加入黄芩苷对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备加样回收供试品溶液，分别进样5μL，测定，计算回收率，结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收率试验

2.2.11 样品测定 取小柴胡汤配方颗粒约0.5g，精密称定，按供试品溶液的制备方法分别制成供试液，分别进样5ul，测定，计算含量，结果见表2。

表2 小柴胡汤配方颗粒样品中黄芩苷含量测定结果

3 讨论

3.1 定性鉴别

小柴胡汤配方颗粒中柴胡的定性鉴别，采用TLC法，并分别与阴性对照液进行对照，结果没有干扰、斑点清晰，专属性强、重现性好，收到良好的效果。

3.2 流动相选择

本实验中采用《中国药典》2005年版一部黄芩药材［含量测定］项下的流动相，结果，分离效果好，因此，确定该流动相为实验研究的流动相。

3.3 提取方法选择

本实验考察了回流、冷浸、超声等提取方法，结果表明超声提取可提取完全，且操作简便、快捷。对超声时间、溶媒用量等因素进行考察，最后确定样品的制备选择70%乙醇100mL超声处理30min为宜。

3.4 方法评价

本文建立的定性、定量方法，可有效控制小柴胡汤配方颗粒的质量；另外，小柴胡汤配方颗粒制备工艺先进，服用携带方便，可为临床应用提供新的用药方式。

［1］王爱军.小柴胡汤临床治验举隅［J］.中国中医药现代远程教育，2009，7（6）：151.

［2］石莹.HPLC测定小柴胡汤丸中黄芩苷的含量［J］.中成药，2007，29（7）：附23.

［3］牛获山，吴悦涛.HPLC检测小柴胡汤剂型改良后黄芩苷含量［J］.黑龙江医药，2008，21（2）：6.

［4］国家药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：211.

Study on Quality Standard for Xiaochaihutang Dispensing Granule

Shi Zhijun，Xu Yiliang
（Jiangyin Tianjiang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Jiangyin Jiangsu214434）

Objective：To study the quality standard for Xiaochaihutang dispensing granule.Methods：Xiaochaihutang dispensing granule was identified by TLC.The content of baicalin in radix scutellariae was determined by HPLC.ResultsThe linear relationship of baicalin was at the rang of0.248 8～1.244 0μg，The average recovery was 99.29%（n＝6），RSD＝0.53%.ConclusionThe methods are available with good reproducibility and can control the quality of Xiaochaihutang dispensing granule effectively.

Xiaochaihutang；dispensing granule；TLC；HPLC；Quality standard

*石志军，Email：shizj＠tianjiang.com

2010-03-02）