急性脑梗死患者循环内皮细胞含量变化的对比分析

李安民

河南商丘市第五人民医院 商丘 476000

循环内皮细胞(circulating endothelial cell,CEC)是目前在活体内评价血管损伤的唯一的特异而直接的指标[1]。内皮细胞的损伤在脑梗死的发生发展过程中起重要作用。我们对60例ACI患者血清CEC进行检测,探讨其在缺血性脑血管病中的作用。

1 资料与方法

1.1一般资料全部病例均系2008～2010年首次发病2周内在我院住院的ACI患者。诊断标准是依据1996年全国脑血管病学术会议修订制定的标准,所有患均经CT或MRI证实。共60例,其中男 39例,女21例;年龄32～80岁。排除标准有：(1)近2个月内有感染史;(2)伴免疫性疾病;(3)伴血液系统疾病;(4)有严重的心、肝、肾疾病;(5)入院后有明显感染症状者;(6)伴有恶性肿瘤。对照组为年龄、性别相匹配的健康者,共20例,其中男14例,女6例;年龄34～79岁。按梗死灶大小进行分组,大梗死灶组最大梗死直径＞4.0 cm,中梗死灶组梗死直径1.5～4.0 cm,小梗死灶组最大梗死直径＜1.5 cm。

1.2方法ACI患者入院后,急性期患者于次日清晨,恢复期患者于第4周空腹取肘静脉血10 mL。健康对照组也按同样方法取肘静脉血 10 mL,取其中2 mL,1500 r/min,离心10 min,分离血清后-20℃保存备用。用 Hladovec等[2]建立的Percoll密度梯度快速一步分离法分离和计数CEC,分离步骤为：(1)将3.0 mL抗凝血以等量生理盐水稀释;(2)加人2.0 mL Percoll分离液后离心,取Percoll界面以上液体作为上层以及Percoll层液体1.0 mL作为中层;(3)将上层液体再次离心(2100 r/min,20 min),弃管中上清,加生理盐水0.5 mL。混匀后一起镜检;(4)在Olympus显微镜下计数。

用Iwata等[3]免疫荧光标记法进行鉴定,证实该细胞是CEC。具体操作步骤如下：(1)取上清液少许涂在玻片上,干燥后用甲醇固定5 min,用PBS漂洗3次,干后滴加兔抗人Ⅷ因子血清,置于37℃中孵育30 min;(2)再次用PBS漂洗3次,干后滴加异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔IgG荧光抗体,方法同上;(3)干燥后滴加缓冲甘油,置Olympus VANOX多功能显微镜下观察。由于本实验中因去除血小板等血细胞影响,所以镜下所见的免疫荧光细胞即CEC。

1.3统计学方法数据以(s)表示,采用单因素方差分析及直线相关分析,由SPSS 10.0软件处理。

2 结果

2.1 2组血清CEC水平比较ACI患者急性期和恢复期血清CEC计数均高于正常对照组(P＜0.01),急性期血清CEC则高于恢复期(P＜0.01)。见表1。

表1 2组血清CEC水平比较

2.2不同面积梗死灶的ACI患者血清CEC水平比较大灶组血清CEC明显高于中灶组(P＜0.01),中灶组血清CEC显高于小灶组(P＜0.01)。见表2。

表2 ACI患者不同梗死灶的CEC水平比较

3 讨论

CEC是指在生理或病理条件下从循环血中获得的血管内皮细胞。CEC形态多样,大多呈不规则多边形,形状呈无核、皱缩、折叠或扭曲状[4]。杨映波等[5]的研究表明,从脐静脉和内皮细胞(EC)培养中发现了EC,这种内皮细胞酷似 CEC,表明CEC可能来自正常脱落的内皮细胞。在受到机械、化学和免疫等因素作用时,EC结构和功能均会发生改变,从血管内皮细胞(VCE)到CEC大致形变的过程为一渐进过程,依次为胞质肿胀、空泡形成、细胞变圆、胞膜破裂及胞核脱出等。如缺血、缺氧、氧自由基均可损伤 EC致CEC增多,另外,肿瘤坏死因子、创伤等均可引起CEC的增加。

正常生理情况下CEC数值是相对稳定的,这是由于血管壁新陈代谢过程中血管内皮细胞脱落至血液中,其脱落速度是恒定的,而在机体受到某些理化因素的刺激,这使得血管受到损伤,外周血液中内皮细胞数量就会增多。沙志一等[6]研究发现,人脐静脉血管内皮细胞(HVEC)经肿瘤坏死因子(TNF)作用后72h后明显拉长、肿胀,通过透射电镜观察可见细胞内线粒体肿胀、变性,次级溶酶体显著增多。这就提示TNF对HVEC有损伤作用。新近研究表明[7],脑微血管内皮细胞的几乎所有功能都会受缺血的影响,缺血不仅影响血-脑脊液屏障,而且还产生一些对大脑有毒的物质。脑血管内皮细胞的损害既是脑缺血损害的结果,又可进一步加重缺血性脑损害的程度。

本研究发现ACI患者中CEC的含量明显高于正常对照组。这一点就提示血管内皮细胞的损害与缺血性疾病呈显性相关,并且与缺血神经元的损害的程度具有显著相关性。因此,如何保护血管内皮细胞,防止血管内皮细胞的脱落的研究,将有助于ACI患者的治疗,尤其是早期预防。

总之,ACI时外周血CEC数量的升高不能忽视。保护血管内皮细胞研究,对缺血性脑血管病的防治将具有重要意义。

[1]Hladovec J,Prerovsky I.Endothelial lesion in hypertension[J].Cor Vasa,1989,31：51-54.

[2]Hladovec J,Rossmann P.Circulating endothelial cells isolated together with platelets and the experimental modification of their counts in rats[J].Thrombosis Research,1973,3：665-674.

[3]Iwata Y,Kuzuya F,Hayakawa M,et al.Circulating endothelial cells fail to induce cerebral infarction in rabbits[J].Stroke,1986,17：506-509.

[4]Dignat-George F,Sampol J.circuiafing endothelial cells in vasculer disorders：new insights into an old concept[J].Eur J Haematol,2000,65：215-220.

[5]杨映波,王正国.创伤使血内皮细胞损伤机理的实验和临床研究[J].第三军医大学学报,1992,14：102-103.

[6]沙志一,金惠铭.肿瘤坏死因子对体外培养的血管内皮细胞的作用[J].中国病理生理杂志,1995,11(5)：455-459.

[7]Betz AL.Alterations in cerebral endothelial cell function in ischemia[J].Adv Neurol,1996,71：301-311.