302例急性白血病患者骨髓细胞形态学诊断结果分析

赵早云

(湖南中医药大学第一附属医院血液科,湖南长沙410007)

急性白血病(AL)分型及亚型的确定与治疗及预后判断有密切关系。目前采用FAB(骨髓细胞形态学)和WHO两种分型方法。收集302例在我院就诊急性白血病初诊病人,用两种不同方法对比,旨在探讨骨髓细胞形态学与临床诊断的关联性。

1 材料与方法

1.1 病例资料 我院血液科门诊和住院的急性白血病初诊病例共302例。男200例,女102例,最小年龄2个月,最大年龄88岁,平均年龄44.1岁。

1.2 方法

1.2.1 形态学检查 将骨髓及血涂片用瑞氏染色分类计数,并作过氧化物酶,非特异性酯酶+氟化物抑制试验及糖原染色等细胞化学染色,按FAB标准确定AL类型。

1.2.2 免疫学检查 治疗前取肝素抗凝骨髓液2-3 ml,常规分离单个核细胞,采用活细胞间接荧光标记,流式细胞仪(Epics XL型,Coulter公司)检测。所用单抗包括T系的CD2、CD3、CD7;B系的CD10、CDI9 、CD22;髓系的 CD13、CDl4、CD33;巨核系的CD42b、CD66以及干(祖)系的CD34等,所有单抗均购自法国hnmunotech公司。阳性标准:淋系及髓系抗原阳性细胞＞20%,CD34＞10%。

1.2.3 染色体检查 治疗前取肝素抗凝骨髓液5 ml,用直接法、24 h培养法和同步法制备染色体,采用R带或G带技术显带。根据ISCN1995年《人类细胞遗传学国际命名体制规定描述核型。

1.2.4 分子生物学检查 分别于治疗前和缓解期取肝素抗凝骨髓液2-3 ml,分离单个核细胞,采用套式逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)方法AML1融合基因和BCR-ABL融合基因转录本,所用引物分别见文献[1,2]。

2 结果

2.1 骨髓细胞形态学及化学染色 302例初始急性白血病患者通过形态学而确诊者285例,诊断确诊率达 94.37%,有8例骨髓原始细胞占21%-29%,根据WHO分型标准,将原FAB分型的MDSRAEB-T划入急性髓性白血病(AML)范筹,9例形态学难以分型的白血病。形态学结合免疫学表型和细胞遗传学、分子生物学特征得以最终确定,结果见表1。

表1 实验室检查结果

2.2 免疫学结果 在9例形态学误诊的急性白血病中,有5例FAB诊断为ALL白血病中,有3例FAB误诊为ALL的白血病患者,细胞化学染色为阴性,经单抗检查,有髓系和(或)淋系抗原表达,而确诊为Mo,杂合型白血病。1例FAB误诊为M5a经过单抗检查,仅有淋系相关抗原CD2,CD3,CD7表达而确诊为L2,1例细胞化学染色为阳性,经形态学诊断为M1,经过单抗检查,髓系,淋系积分大于2,定为杂合型白血病。

2.3 A遗传学结果 在9例FAB分型急性白血病中,3例染色体核型正常,6例能检出特征性的染色体核型。1例FAB分型误诊为L2,单抗检查CD33,CD34,染色体检查t(+4)为最终确诊M4,值得一提的是样本6,样本8,细胞形态学相似,免疫表型难以确认的M3b,M2b通过染色体核型与融台基因的检查得以确诊。通过临床治疗均取得了满意效果。

3 讨论

阅片者丰富的经验,配合细胞化学染色对急性白血病的诊断准确率是很高的,在本组302例急性白血病病例中,有8例骨髓原始细胞占21%-29%,根据WHO分型标准,将原FAB分型的MDS-RAEB-T划入急性髓性白血病(AML)范筹,285例经FAB分型而得到确诊,准确率达到94.37%。与国内陈玉兰的研究相似[3],由于FAB分型判断急性淋巴细胞白血病及急性非淋巴细胞性白血病主要通过过氧化物酶染色POX而定。因此对于具有高度异质和多系列白血病细胞,依细胞表面免疫学标志,进行免疫学分型有良好的客观性和可重复性,可大大提高诊断率[4],本组6例均为FAB诊断后又经免疫学分型得到或纠正或确诊。特别对于ALL-L2 POX为阴性的白血病患者,免疫学表型的检测尤显重要,不仅可以判断白血病细胞的来源,还可以判断白血病所处的阶段,对临床的诊断治疗起着重要的作用。对于形态学、免疫学难以确定的M3b与M2b的误诊患者,结合染色后核型与融合基因均能最后确诊。

综上所述,细胞形态学检查仍然是白血病诊断最直接、最经济的一种重要手段,结合免疫学检查可大大提高诊断率,最后再结合遗传学检查可以使诊断达100%。

[1]周剑彪,何 军,薛永权,等.伴t(12;2I)易位的儿童急性淋巴细胞白血病的临床和实验研究[J].中华儿科杂志,2000,38:725.

[2]云 升.王升五.PCR技术检测白血病BCR-ABL融台基因的mRNA序列.见:林万晴.主编PCR技术操作和应用指南[J].第1版.北京:人民军医出版社,1995,432-433.

[3]陈玉兰,杨凤华.急性白血病FAB分类109例分析[J].中国误诊学杂志,2007,7(24):5856.

[4]6 Lolof LO,Foa R.Diagnostic and prognostic advances ia the immunophenotypic and genetic characterization of acute Leukemia[J].Eur JHaematol,1995,59t1.