香果健消片质控方法研究I：蜘蛛香主要成分的鉴别和含量测定

肖雨婷，赵明芬，彭 芳，肖培云

（大理学院药学院，云南大理 671000）

香果健消片质控方法研究I：蜘蛛香主要成分的鉴别和含量测定

肖雨婷，赵明芬，彭 芳，肖培云*

（大理学院药学院，云南大理 671000）

目的：建立香果健消片中橙皮苷的鉴别和含量测定方法。方法：采用薄层色谱法对橙皮苷进行鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC）测定橙皮苷的含量，以Agilent XBP-C18（4.6mm×250mm，5μm）为分析柱，流动相为甲醇-5%冰醋酸（35∶65），检测波长283nm。结果：薄层鉴别结果显示，橙皮苷在相应的色谱条件下分离效果良好；HPLC结果显示，橙皮苷在0.202～4.040μg之间线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为100.3%（n=6），RSD为1.28%。结论：此方法简便、稳定，重现性好，可用于本品中橙皮苷的鉴别和含量测定。

香果健消片；蜘蛛香；橙皮苷

香果健消片是由蜘蛛香、木香、草果等药材经提取制成的中药制剂，具有健胃消食之功效，用于消化不良、气胀饱闷、食积腹痛、胸满腹胀。现行质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂〔1〕，该质量标准中，只用香草醛进行显色鉴别，无专属性较强的薄层色谱鉴别和含量测定方法。为了保证本品的用药安全，更好地控制药品质量，本实验对方中主药蜘蛛香进行薄层色谱法（TLC）鉴别，并采用高效液相色谱法（HPLC）测定其主要化学成分橙皮苷的含量〔2〕。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent1200高效液相色谱仪（包括G1311A四元泵、G1314B可变波长、G1316A柱温箱、G1329A自动控温进样器、G1322A真空脱气机）；AgilentXBP-C18（4.6×250mm，5μm）分析柱；电子分析天平（瑞士梅特勒AL204-IC）；薄层色谱成像仪（武汉药科新技术开发有限公司YOKO-ZS）；超纯水机（台湾艾柯纯水设备厂KL-UP-UV-20）；超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司SB5200DT）。

1.2 材料 香果健消片（云南云河药业有限公司生产，批号：090603，090706，090802，081201）；橙皮苷对照品（批号：110721-200613，中国药品生物制品鉴定所提供）；硅胶G（青岛海洋化工有限公司生产）；甲醇为色谱纯（美国Fisher公司）；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。

2 鉴别

2.1 橙皮苷对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品5.050mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.505mg/mL的对照品贮备液〔3〕。精密移出上述溶液400μL，用甲醇稀释至1.0mL，即得对照品溶液（含橙皮苷0.202mg/mL）。

2.2 供试品溶液的制备 称取不同批号（090603、090706、081201）各10片，去糖衣，精密称定，研细，各取约1.0g，精密称定，加入20mL甲醇，称定重量，25℃超声提取30min，放冷，滤过，滤液置水浴上挥干，残渣各加入2.0mL甲醇，溶解，即得供试品溶液〔3〕1，2，3（批号分别为090603、090706、081201）。

2.3 蜘蛛香对照药材溶液的制备 按处方制备蜘蛛香对照药材，再按“2.2”项制备，即得蜘蛛香对照药材溶液。

2.4 阴性对照品溶液的制备 按处方制备缺蜘蛛香的阴性对照品，再按“2.2”项制备，即得阴性对照品溶液。

2.5 薄层色谱条件及结果 参照TLC试验〔4〕，用毛细吸管吸取上述供试品、对照品、对照药材、阴性对照溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶15）的上层溶液为展开剂，进行一次展开，展至约6cm，取出，晾干。再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶3）为展开剂，进行二次展开，展开至16cm，取出，晾干，喷以3%AlCl3溶液，在110℃下加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视〔5〕。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无相应的荧光斑点。见图1。

3 含量测定

3.1 系统适用性试验 色谱柱：Agilent XBP-C18分析柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-5%冰醋酸溶液（35∶65）；检测波长283nm；柱温35℃；流速1.0mL/min。理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于2 500〔5〕。

图1 蜘蛛香的TLC图谱

3.2 供试品溶液的制备 取本品20片，去糖衣，精密称定，研细，取约0.5g粉末，精密称定，加入20mL甲醇，称定重量，25℃下超声提取30min，放冷后，补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

3.3 阴性对照品溶液的制备 取缺蜘蛛香的阴性对照样品0.5g，按“3.2”项供试品溶液的制备方法制备，即得。

3.4 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5μL，分别注入液相色谱仪，结果供试品色谱中呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，阴性对照品在橙皮苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。见图2。

图2 HPLC色谱图

3.5 标准曲线的制作 按“3.1”项色谱条件，取0.202mg/mL的对照品溶液，分别以1，2，5，8，15，20μL进样测定，以橙皮苷的峰面积峰值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=2 036.6X＋10.554（r＝0.999 9）。结果表明，橙皮苷在0.202～4.040μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

3.6 精密度试验 按“3.1”项色谱条件，取0.202mg/mL的对照品溶液连续6次进样，峰面积的RSD为0.83%。结果表明，仪器精密度良好。

3.7 稳定性试验 按“3.1”项色谱条件，按“3.2”项制备供试品溶液，在0，2，4，6，8，10，12h各进样1次，测定供试品溶液中橙皮苷峰面积值，所得橙皮苷的峰面积RSD为2.75%。结果表明：供试品溶液中橙皮苷12h内稳定。

3.8 重现性试验 取同一批号（090603）样品6份，按“3.2”项制备各供试品溶液，并按“3.1”项色谱条件进行测定，橙皮苷的含量为0.85mg/片，RSD为2.43%。

3.9 加样回收率试验 取已知含量的同一批号（090603）样品6份，每份约0.45g，精密称定，各加入橙皮苷贮备溶液（0.505mg/mL）1mL，按“3.2”项供试品溶液制备方法制备，按“3.1”项色谱条件测定，计算回收率。见表1。

表1 回收率测定结果

3.10 样品含量测定 取4个不同批号的药品，按“3.2”项供试品溶液制备方法制备，按“3.1”项色谱条件测定，计算。结果见表2。

表2 含量测定结果

4 讨论

橙皮苷在甲醇中易溶解，故在薄层色谱鉴别、HPLC测定橙皮苷时选用甲醇作溶剂〔6〕。

原质量标准中“鉴别”属化学鉴别，由于其专属性不强，故本实验采用TLC对香果健消片中蜘蛛香主要化学成分橙皮苷进行了薄层鉴别。对薄层条件进行优化：考察了不同比例的展开剂（乙酸乙酯-甲醇-水、甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水）系统，结果采用乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶15）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶3）为展开剂。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，有5个斑点与对照药材相对应，阴性对照无相应的荧光斑点。试验结果表明阴性对照溶液对供试品均无干扰，专属性强、斑点清晰，特征斑点分离效果良好，斑点无拖尾现象，故此方法可用作香果健消片中橙皮苷的鉴别。

对制剂中橙皮苷进行含量测定研究，为了在短时间内获得好的分离效果，对色谱条件进行了优化：首先，考察了不同组成和比例的流动相〔5，7-8〕（乙腈-水、甲醇-水）系统，酸主要比较了冰醋酸和磷酸。结果乙腈-水系统分离效果不如甲醇-水系统，且在甲醇-水系统中加入5%的冰醋酸可提高分离效果。综合考虑各因素后确定采用甲醇-5%冰醋酸溶液（35∶65）为流动相进行洗脱。其次，考察了不同的波长〔5，9〕（280、283nm）、不同的柱温（25、30、35℃），最后确定波长为283nm、柱温为35℃。在上述条件下，能够在15min之内测定橙皮苷峰，且橙皮苷峰达到基线分离。此方法简便、快速、可靠，适用于香果健消片中橙皮苷的含量测定。

〔1〕国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准〔M〕.北京：人民卫生出版社，1990：120.

〔2〕陈发奎.常用中草药有效成分含量测定〔M〕.北京：人民卫生出版社，1999：188-198.

〔3〕吴子富，李晶，文萍，等.龙甘胃舒分散片的质量控制〔J〕.中国医院药学杂志，2009，29（11）：878-881.

〔4〕国家药典委员会.中华人民共和国药典〔M〕.北京：化学工业出版社，2005：附录31.

〔5〕池浩波，张雪原，林晓辉，等.宝儿康散质量标准修订研究〔J〕.中国药品标准，2008，9（5）：334-338.

〔6〕何继祥，许庆，朱正华，等.蜘蛛香野生变家种可行性研究〔J〕.云南中医中药杂志，2008，29（10）：29-30.

〔7〕石晋丽，刘勇，肖培根.HPLC法测定不同产地蜘蛛香中橙皮苷的含量〔J〕.中草药，2005，36（3）：449-450.

〔8〕狄宏晔，石晋丽，闫兴丽，等.蜘蛛香药材质量标准研究〔J〕.中国中药杂志，2007，32（22）：2357-2359.

〔9〕程静，解翠珠，何继祥.野生蜘蛛香与家种蜘蛛香中橙皮苷含量对比〔J〕.中国现代药物应用，2008，2（22）：62.

（责任编辑 蒋 康）

Research of the Quality ControlMethod of the Xiangguojianxiao TabletsⅠ:Indentification and Determ ination of the Major Components of Valeriana Jatamansi Jones

XIAO Yuting,ZHAOMingfen,PENG Fang,XIAO Peiyun*
（C ollege of Pharmacy,DaliUniversity,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To establish a method for the identification and determination of hesperidin in Xiangguojianxiao tablets.MethodsHesperidin in Xiangguojianxiao tablets was identified by TLC,and the contentswas determined by HPLC.Agilent XBPC18（4.6mm×250mm,5μm）was used as analytical column.The ana-lyticalmobile phase was composed ofmethanol-5%and glacial acetic acid（35:65 V/V）.The determination wave-length was 283 nm.Results:Hesperidin in Xiangguojianxiao tabletswas separated very well under the corresponding chromatographic condition.The calibration curve of hesperidin was linear in the range of 0.202～4.040μg （r=0.999 9）；recovery rate was 100.3% （n=6）,and RSD was 1.28%.ConclusionThis method is simple,stable and reproducible,and can be used for identification and determination of hesperidin in Xiangguojianxiao tablets.

Xiangguojianxiao tablets;valeriana jatamansi jones;hesperidin

R975+.1

A

1672-2345（2010）08-0009-03

大理学院大学生科研基金资助项目（2009DXSY01）

2010-06-12

肖雨婷，主要从事药学研究.

*通信作者：肖培云，副教授，电话：15808729786