冰冻切片与细胞印片联合应用在临床病理术中诊断的价值

李淑莲，李丽娟，代海平

牡丹江医学院附属红旗医院 病理科，黑龙江 牡丹江 157011

近几年环保型立式恒冷箱式冰冻切片机以其优越的性能，精密的厚度取代了以往的二氧化碳冰冻法和半导体制冷冰冻切片法[1]。我科在7年多使用恒冷箱冰冻切片机的过程中，其精密的厚度、超薄的制片，给术中病理诊断带来了极大方便。另外我科在做冰冻切片的同时，也采用了细胞印片，二者相结合，相互补充，联合应用，从而大大提高了术中冰冻病理诊断的准确率，降低冰冻切片的误诊率。

1 材料与方法

1.1 一般材料

收集2009年1月～2009年12月在我院病理科进行术中冰冻快速诊断的甲状腺138例，乳腺73例。

1.2 操作方法

使用德国Leica CM1900立式恒冷箱式冰冻切片机1台，内附5个组织固定台，以便更换组织，Leica819刀片1片、细毛笔刷1只。操作前，先检查箱内温度是否为（-20）～（-22）℃（每天上班先把机器温度调至-20℃，下班时再把温度调至-4℃。这样可以减轻发动机的消耗，增加使用寿命。温度设定过高，组织切片容易打折不平整；温度过低，组织脆且易碎，切片不完整而且组织细胞变化大，均影响诊断）；刀片是否有划痕。操作时，先将送检的新鲜标本由病理医师用取材刀做多切面剖开，选择病变明显的部位，用洁净的载玻片轻轻按压做2张印片，同时组织块做冷冻切片，均进行固定，染色。将印片与冷冻切片两者联合分析，发出诊断报告，最后结果以石蜡切片为标准，必要时免疫组化支持。

2 结果

经Leica CM1900冷冻切片机制出的冰冻片，其厚度4～5μm，能平整且连续切片，染色后颜色鲜艳亮丽，甚至优于石蜡制片。由于组织在快速制冷时，组织细胞会有不同程度的变形，所以诊断难免会有误差。综观国内外有关资料，冰冻切片诊断的确诊率为94%～97.4%，误诊率不到2%，未能确诊率1%。文献报道细胞印片准确率为85%～100%，与冷冻切片相似[2]。本文73例乳腺肿物冰冻切片，细胞印片及联合诊断结果对比见表1。38例甲状腺肿物术中冰冻切片，细胞印片及联合诊断结果对照见表2。

表1 73例乳腺肿物冰冻切片，细胞印片及联合诊断结果对比

表2 138例甲状腺肿物术中冰冻切片，细胞印片及联合诊断结果对照

由表1中可看出73例乳腺肿物术中冰冻诊断，确诊70例，确诊率95.91%。误诊1例，误诊率1.36%，出现于导管内乳头状癌误诊为乳头状瘤伴上皮不典型增生（此例印片细胞学也误诊）。延迟诊断2例，1例为乳腺增生症伴导管上皮非典型增生；1例为纤维组织瘤样增生。术中印片细胞学确诊69例。确诊率94.52%，误诊1例，延迟诊断3例，其中2例为乳腺增生性病变伴导管上皮不典型增生，1例为炎症性病变。冷冻切片与细胞印片学检查联合确诊71例，确诊率97.26%。表2中138例甲状腺肿物术中冰冻切片，确诊131例，确诊率94.92%，误诊3例，误诊率2.27%。其中2例为甲状腺微小乳头状癌，误认为甲状腺乳头状增生，细胞印片学也如此误诊；1例为低分化滤泡癌误诊为结节性甲状腺肿。延迟诊断4例，其中2例为结节性甲状腺肿伴乳头状增生；1例为滤泡样甲状腺肿；1例为滤泡增生而延发。术中印片细胞学确诊132例，确诊率95.65%。误诊3例，其中1例为结节性甲状腺肿伴甲状腺炎；2例为微小乳头状癌；迟发3例，均为甲状腺桥本氏病，印片中见到明显核异性细胞而延诊。冷冻切片与细胞印片联合确诊134例，确诊率为97.1%。

3 讨论

冰冻切片技术系由Pieter deRiemer于1818年首创，1891年Welsh开始用于病理诊断，1905年Wilson Mecarty将其列为正式诊断方法。目前国内外普遍应用冰冻切片技术及其他快速诊断技术来解决手术台上的诊断问题[3]。

手术中病理诊断（Intraoperative Pathology Diagnosis）的方法包括冰冻切片法、快速石蜡切片法和手术中印片细胞学诊断。它们之间的比较如下：

(1)快速石蜡制片法要求。① 组织块较小，否则脱水浸蜡不佳，无法切片，影响诊断，观察范围小，易遗漏病变；② 时间长；③ 组织块不易长期保存。

(2)印片细胞学诊断优点是：① 细胞结构清晰；② 适用于难于切片的组织，如脂肪、骨组织和钙化组织；③ 制片速度快，节省时间。缺点是：① 印片或涂片缺乏组织结构，有时不能肯定诊断；② 炎症或其他原因可引起细胞异型性改变，核染色质深染，核固缩，细胞大小不等，在细胞学观察中可能误认为恶性肿瘤细胞，造成假阳性错误诊断；③ 细胞印片不均匀，质量差，印片中细胞成分少，均影响细胞学诊断的准确性。

(3)冰冻切片中误诊原因大致可归纳为以下几点：① 标本取材有限或不当，病理医师无目的地随便取材，造成假阴性的结果；② 制片技术问题：切片过厚，过碎，捞片不全，染色不佳等制片技术原因，均直接影响冰冻切片的诊断；③ 阅片解释错误：在冰冻切片上细胞形态不典型，辨认常不准确，容易发生误诊，如将浆细胞误认为癌细胞；④ 冰冻切片技术不适用于骨和脂肪组织，因骨组织未脱钙，不能切片，脂肪组织难以冷冻，亦不能切片。

以上分析可以看出，优势互补，联合使用印片细胞学检查与冰冻切片相结合，有助于诊断的准确性[4,5]，前者看细胞，后者看结构，二者可以互相弥补，综合分析，减少误诊。

总之，冰冻切片诊断对外科医生来说是非常重要的，正如Ackerman所说：冰冻切片是为外科医生确定治疗的决心所必需[6]。从而说明，要想在术中冰冻中得到一份及时、准确的病理结果，不仅要有经验丰富的病理医师承担，技术过硬的技术员操作，而且还要有一台性能优良、质量上等的冰冻切片机与细胞印片相结合才行[7,8]。

[1]龚志锦,詹镕洲.病理组织制片和染色技术[M].上海:科学技术出版社,1993:26.

[2]钱利华,阚秀.术中印片细胞学诊断的应用[J].诊断病理学杂志,1996,2(3):93.

[3]史景泉,陈意生.现代外科病理学[M].北京:人民军医出版社,1998:5-7.

[4]陈乐真,于占洋.提高冷冻切片诊断准确性的经验和体会[J].中华病理学杂志,2000,29(2):140-142.

[5]李平,王燕霞,赵俊军,等.乳腺肿瘤术中细胞学与冷冻诊断的互补作用[J].诊断病理学杂志,2004,11(2):112.

[6]柴小兰,张兴义,王艳红.乳腺肿块术中印片细胞学及冷冻切片染色结果对比分析[J].新疆医科大学学报,2009(6):120-121.

[7]魏永敬,等.154例乳腺病变术中印片细胞学与冷冻切片诊断分析[J].西南军医,2006(4):20-22.

[8]刘自光.250例乳腺病变术中冷冻切片结合组织印片快速诊断分析[J].实验与检验医学,2010(1):103-104.