改良EDTA-Na2滴定法测定乳钙的方法

李 群 王桂芝 黑龙江省鹤岗疾病预防控制中心（154101)

由于乳中富含脂肪，用测定血液总钙的EDTA-Na2滴定法测定乳中钙的含量，存在滴定终点不易判断，颜色不稳定易褪色等缺点，为此同事们在原方法的基础上，于钙红指示剂中添加聚山梨酯-80，并增加氢氧化钠的浓度，以此提高乳钙测定结果的可靠性。

1 材料和方法

1.1 标本 用消毒湿毛巾清洁乳头、乳房，然后收集乳汁（晨乳）约2～3ml。

1.2 试剂 ①钙红指示剂：称取钙红0.5g，溶于100ml甲醇中，于上述钙红指示剂中按100ml加入2.0ml聚山梨酯-80。②0.8mmol/L氢氧化钠溶液。③EDTA-Na2溶液：溶解EDTA-Na20.4g于500ml去离子水中，再稀释至1L，用钙标准液进行标定，结果EDTA-Na21ml相当于0.1mg钙。④钙标准液2.5mmol/L。

1.3 方法 取试管2只，各加入1份母乳0.2ml，然后加0.8mmol/L NaO H1.0ml，其中1只试管加原钙红指示剂1滴，另1只加钙红-吐温指示剂1滴，分别用EDTA-Na2溶液进行滴定，测定30份乳。

2 结果

2.1 比较试验 取乳30份，分别用原法和改良法测定乳中钙含量，结果原法为（6.77±1.53）mmol/L，改良法为（6.64±1.54）mmol/L，两种方法相比较差异无显著性（t=1.296，P＞0.05）。

2.2 回收试验 取钙含量为5.4mmol/L的乳0.2ml，加入浓度为2.5mmol/L的钙标准液0.1ml，平行测定5份回收实验样品，其回收率为97.6%～101.4%，平均回收率99.5%。

2.3 重复性试验 同份乳等份分装，分5d测定，每天5份，作批内、批间试验，结果批内试验为（5.49±0.72）mmol/L，RSO为13.07%。

2.4 试剂稳定性试验 改良配方置室温应用3个月与置冰箱保存的原配方和改良配方在滴定结果，终点颜色变化深浅均一致。

2.5 褪色时间观察 用原配方指示剂滴定母乳钙后的终点颜色褪色很快，约5～10min，改良指示剂的终点颜色在室温(18℃)放置30min才完全褪去，褪色时间较原配方明显延长。

2.6 改良法滴定后终点观察 反应液较原法清晰，终点颜色变化明显，易于掌握。

3 应用

用改良法测定鲜乳64份，其中高于或等于正常生理母乳钙7.5mmol/L，仅有19例，占29.6%，其余均低于7.5mmol/L，平均值为6.1mmol/L，最低值仅2.6mmol/L。

4 讨论

经用原法和改良法分别测定母乳钙30例，两者比较差异无显著性（P＞0.05），改良法不仅终点易判断，而且稳定时间较长。

从测定64份母乳钙发现，我地区母乳钙含量普遍低于正常生理含量，合格仅点29.6%，因此要加强这方面的宣传。