子宫肌瘤中ER、PR和IGF-1受体表达的研究

王立群，王霜秋，赵 静 ，赵秀芝

（1.河北省唐山工人医院，河北唐山 063000；2.华北煤炭医学院，河北唐山 063000）

子宫肌瘤是女性生殖器官中最常见的良性肿瘤，多见于30～50 岁妇女，其中 40～50 岁妇女的发生率高达 51.2%～60.0%[1]。它可引起出血、感染、压迫症状及继发不孕等多种并发症，是目前子宫全切的主要原因之一，严重威胁了女性的身体健康，其病因及发病机制目前仍不十分清楚。本组研究通过对肌瘤患者雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）表达的检测，以探讨子宫肌瘤的发生与IGF-1R的关系，为临床药物治疗本病提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

病例（实验标本）为2007年9月～2008年2月在我院妇科手术治疗的子宫肌瘤患者60例，年龄29～53岁，术前3个月未使用任何激素类药物，全部病例均经病理证实为子宫平滑肌瘤。结合月经史和子宫内膜病理结果，有36例为增生期，24例为分泌期。子宫肌瘤组（S组）为手术切除的子宫肌瘤组织，对照组分别为子宫肌瘤周围邻近肌层组织（A组）及远离肌瘤5 cm的正常平滑肌组织（B组）各60例。

1.2 方法

1.2.1 HE染色及诊断 手术切除子宫或肌瘤后，立即取肌瘤组织、肌瘤周围肌层组织及远离肌瘤5 cm的正常肌层组织各1份，置于10%中性福尔马林液体中固定，常规石蜡包埋，切4 μm厚连续石蜡切片，常规HE染色，经光镜观察组织学形态，做出病理诊断，并进行筛选，以备免疫组化方法检测。

1.2.2 子宫组织ER、PR及IGF-1R的免疫组化检测 ①石蜡切片经二甲苯脱蜡至去离子化。②采用EDTA修复缓冲液进行抗原高压热修复。③修复后的切片自然冷冻至室温。④X-100室温洗涤10 min。⑤3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，室温10 min。⑥PBS缓冲液洗涤3 min×3次。⑦滴加特异性抗体（30 μl/片），孵育过夜。 ⑧PBS 缓冲液洗涤 3 min×3次。⑨PV9000试剂盒中的试剂1（大分子通透剂）37℃孵育30 min。⑩PBS缓冲液洗涤3 min×3次；PV9000试剂盒中的试剂（抗鼠/兔抗体酶复合物）37℃孵育30 min；PBS缓冲液洗涤3 min×3次。DVB镜检控制显色；流水冲洗3 h以上，以去除DVB残留物。苏木素复染，脱水，透明涂封片。PR（ZM-0215）、ER（ZM-0104）、EGFR（ZM-0083）均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.3 形态观察与结果测定 在光学显微镜下对标本中的免疫阳性细胞分布进行观察、定位及初步分析判断。ER、PR的阳性细胞标准为细胞核或细胞浆染色、IGF-1R阳性细胞标准为细胞膜染色。在400高倍镜下观察5个视野计算阳性肿瘤细胞数占肿瘤细胞总数的比例，阳性细胞数大于10%确定为阳性。

1.3 统计学分析

所得计数资料数据采用四格表χ2检验，当n≥40但有1≤T＜5时，用校正的χ2检验，当n＜40时，用四格表的确切概率法计算，P＜0.05为差异有统计学意义。所有统计分析均采用SPSS 10.1统计软件处理。

2 结果

本次实验结果显示，子宫肌瘤细胞、肌瘤周围肌层细胞、远离肌瘤5 cm的正常肌层细胞均见ER、PR和IGF-1R有程度不同的表达。IGF-1R在子宫肌瘤中的表达量明显高于正常子宫平滑肌组织，IGF-1R为细胞膜受体，其阳性颗粒为棕色。ER、PR阳性颗粒主要位于细胞核内，偶见于胞质。比较三种细胞ER、PR和IGF-1R的表达，肌瘤细胞最强，肌瘤周围肌层细胞次之，正常子宫肌层细胞最弱。两种肌层细胞ER、IGF-1R表达差异无统计学意义（P＞0.05）。三种细胞PR表达差异无统计学意义（P>0.05），但肌瘤细胞PR表达较ER表达明显增强，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同组别子宫组织ER、PR、IGF-1R的表达（%）Tab.1 Expressions of ER，PR and IGF-1R of differential groups of uterine tissue（%）

子宫肌瘤细胞和肌瘤周围肌层细胞ER表达在增生期明显高于分泌期（P＜0.05），而IGF-1R表达在分泌期高于增生期（P＜0.05），增生期和分泌期PR表达差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表 2。

3 讨论

目前认为子宫肌瘤的发生发展可能与遗传、卵巢内分泌功能、雌、孕激素及肌瘤组织中雌、孕激素受体、生长因子、细胞凋亡、癌基因与抑癌基因、细胞免疫等有关。雌、孕激素的促有丝分裂作用是由一些生长因子介导的[2]，其中IGF-1的作用可能最为显著[3-4]。本实验结果表明子宫肌瘤细胞中IGF-1受体表达明显高于肌瘤周围邻近肌层细胞及远离肌瘤5 cm的正常肌层细胞，差异有统计学意义（P＜0.05）。子宫肌瘤组织中雌、孕激素受体阳性百分比明显高于正常平滑肌组织，统计学上有明显差异；相关性分析表明：IGF-1受体的含量与雌、孕激素受体含量均呈显著正相关。高雌、孕激素导致了子宫肌瘤的发生、发展；而肌瘤组织中高水平的IGF-1R，与通过自分泌/旁分泌的IGF-1结合，产生一系列肌瘤细胞增殖的效应，促进肌瘤不断生长[5]。本次实验发现IGF-1受体含量与雌激素、孕激素含量均呈显著正相关，说明IGF系统与卵巢甾体激素可能相互促进、相互协同，共同促进子宫肌瘤的生长。

表2 不同组别子宫组织ER、PR、IGF-R在增殖期和分泌期的表达（%）Tab.2 Expressions of ER，PR and IGF-1R of differential groups of uterine tissue in proliferative and secretory phase（%）

[1]曹泽毅.中华妇产科学[M].北京:人民卫生出版社,2004:1082.

[2]王世阆.子宫肌瘤[M].2版.北京:人民卫生出版社,2000:4-12.

[3]Strawn EY Jr，Novy MJ，Burry KA，et al.Insulin-like growth factor-1 promotes leiomyoma cell growth in vitro[J].Am J Obstet Gynecol,1995,172(6):1837-1843.

[4]Vanderven LT，Roboll PJ，Gloudemans T，et al.Expression of insulinlike growth factors(IGFs)，their receptors and IGF binding protein-3 in normal begin and malignant smooth muscle tissuss[J].Br J Cancer,1997,75(11):1631-1640.

[5]Wang ZH，Ma JX,Zeng BJ,et al.Correlation of glioma cell regression with inhibition of insulin-like growth factor 1 and insulin-like growth factor-binding protein 2 expression[J].Neuroendocrinology,1997,66:203-206.