利用气相色谱检测黄瓜果实中霜霉威的残留量

马佰慧，秦志伟，谭行之

（东北农业大学园艺学院，黑龙江哈尔滨，150030）

黄瓜霜霉病是黄瓜生产中的主要病害之一，其来势猛、传播快、为害重，能在1～2周内使植株大部分叶片枯死，造成严重减产，以致绝收[1]。为了防治霜霉病，在生产上需使用大量农药，不仅提高了生产成本，也易造成农残量超标，为害消费者健康。长期食用受污染蔬菜，是导致癌症、动脉硬化、心血管病、胎儿畸形、死胎、早夭、早衰等疾病的重要原因。霜霉威（Propamocarb），是国内抑制霜霉病病害的主要喷洒类药剂之一，能够有效地抑制霜霉病的扩散，目前在生产上已广泛使用，因而选择一种快捷的方法定量分析黄瓜内霜霉威残留量尤为重要[2，3]。本试验的目的就是建立一种快速、准确、经济、实用的黄瓜果实霜霉威残留量的检测方法。

1 材料与方法

1.1 试验材料

①试验样品 供试材料D0313（腌渍型）、D0351（腌渍型）、D0328-6（欧洲鲜用型）、北进（华北型）、D9320-2（华南型）均是经过多代自交选育的自交系，由东北农业大学园艺学院黄瓜育种研究室提供。

②仪器设备 岛津GC-2010气相色谱仪；岛津 Rtx-1 （30 m×0.25 mm×0.25 μm）色谱柱；AOC-20i自动进样器；旋转蒸发仪；DY89-Ⅰ型高速玻璃均质器；Philips HR2860高速组织捣碎机，硅烷化白色担体玻璃层析柱（20 mm×20 cm），250 mL分液漏斗。

③试剂 丙酮（分析纯），乙醚（分析纯），甲醇（色谱纯），购自天津市化学试剂六厂；霜霉威标准品（≥99.0%）250 mg原药（由美国Sigma公司提供，货号45638）；霜霉威 （由黑龙江强尔生化技术开发有限公司提供）；氯化钠，无水硫酸钠（天津永大化学试剂有限公司）。

1.2 试验方法

①农药喷施 试验在东北农业大学设施园艺中心进行。选取霜霉威400倍液喷洒，共喷药3次，第1次在黄瓜植株长出根瓜时进行喷洒，每隔7 d 1次，最后一次喷药后间隔7 d取样[4]。供试材料采用随机区组设计，3次重复。采用立架式单蔓栽培，其他田间管理同一般黄瓜栽培。

②色谱条件 色谱柱：岛津 Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）毛细色谱柱；检测器：FID；载气（N2）：30 mL/min；空气：400 mL/min；氢气：40 mL/min；程序升温：70℃持续 3 min，30℃/min升温至 230℃，230℃持续10 min；进样口温度：260℃；检测器温度：290℃；恒压；不分流；进样量 1 μL。

③配制标准溶液 标准储备液：称取10 mg霜霉威标准品，用甲醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，该溶液浓度为0.1 mg/mL。吸取储备液10 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至100 mL作为标准中间液，该溶液浓度为10 μL/mL。标准工作液分别取标准中间液 0.01 mL，0.02 mL，0.1 mL，0.5 mL，1 mL和5 mL于5个100 mL容量瓶中，甲醇定容至浓度分别为 0.01 μL/mL，0.02 μL/mL，0.1 μL/mL，0.5 μL/mL，1.0 μL/mL 和 5 μL/mL。

④标准曲线与检出限 按上述色谱操作条件进行测定得到6个霜霉威标准溶液的气相色谱图，见图1。以标准样品的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，得到霜霉威的标准曲线及相关系数。标准曲线呈现较好的线性关系，在浓度范围0.01～5 μL/mL内线性方程为y=1 534.7+15 333.9x，线性相关系数为0.994，本方法的最小检出限为0.01 μL/mL，表明本方法可以对霜霉威进行准确定性与定量分析。

图1 1.0 μL/mL霜霉威标准溶液气相色谱

表1 5个黄瓜品种的霜霉威残留量

⑤样品溶液制备 a.提取与净化。称取待测成熟商品黄瓜果实500 g，在组织捣碎机中捣碎，称取25.0 g，加入 80 mL 丙酮∶水为 7∶1（V/V）混合液，高速匀质器中匀质5 min，抽滤，滤渣用丙酮∶水为7∶1（V/V）混合液洗涤后再重复上述操作，合并滤液在45℃以下浓缩至约40 mL。

移入预先注入50 mL乙醚和5 g氯化钠的250 mL的分液漏斗中，震荡，静置，下层水相移入200 mL三角瓶中，上层有机相移入250 mL三角瓶中。水相中加入50 mL乙醚，按上述操作重复2次，合并乙醚层置于上述250 mL三角瓶中。置于层析柱中（内置约2 cm无水硫酸钠）脱水。

b.浓缩。65℃用旋转蒸发仪将提取液浓缩至近干，用甲醇定容至1 mmol/L，待上机检测。

2 结果与分析

2.1 样品检测分析

分别对5种类型的黄瓜品种进行分析，其中两种的色谱分析结果如图2，图3，表1所示。

2.2 方法的准确度和精密度

在空白黄瓜样品中，分别添加浓度为0.1 μL/mL、1.0 μL/mL、5.0 μL/mL 的霜霉威标准溶液， 每个浓度作3次重复。其结果见表2。

试验结果表明，霜霉威在黄瓜中的添加回收率为85%～94%，相对标准偏差是在1%～2%，可以满足残留量定量检测的要求[5]。

表2 黄瓜中不同浓度霜霉威的添加回收率

图2 D0351气相色谱

图3 D9320-2样品气相色谱

3 讨论

利用气相色谱FID检测器能够有效地分析不同黄瓜的霜霉威残留量。减少霜霉威的损耗、精确检测霜霉威的残留量是分析的关键。近几年有关文献报道，也可先用酸碱法对霜霉威进行处理后再进行分析[6]。根据试验结果可以看出，本文所用的检测方法，分离度好、最低检出限、回收率、准确度和精密度均符合农残分析的要求。

根据结果显示，D9320-2、北进等华南型、华北型鲜用黄瓜的霜霉威农残量相对较高，D0351等腌渍型黄瓜的霜霉威农残量则相对较低，这验证了本教研室刘芳芳[7]的检测结果。研究发现，相同的喷洒条件与种植条件下，瓜叶面积大、主茎粗的华南、华北型黄瓜霜霉威农残量比D0351等腌渍型黄瓜的农残量高了十几倍。这说明不同生态类型的黄瓜种质，残留量的高低明显不同。

4 结论

本试验对黄瓜的霜霉威残留量进行研究，采用岛津 GC-2010 气相色谱仪，Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）石英毛细管柱对黄瓜中霜霉威的含量进行了测定，在10.800 min左右出峰，且分离度好，回收率、准确度和精密度均符合农药分析的要求。节省了样品的检测时间，是一种快速检测黄瓜中霜霉威农药残留有效的新方法。

[1]高利，庞金安.黄瓜主要病害抗性遗传研究进展[J].中国蔬菜，2004（1）：63-66.

[2]华小梅，单正军.我国农药的生产，使用状况及其污染环境因子分析[J].环境科学进展，1996，4（2）：33-44.

[3]黄健坤，戚佩坤.广州地区黄瓜疫病病原菌的鉴定及防治研究[J].华南农学院学报：自然科学版，1982，3（2）：36-43.

[4]赵为武.农产品农药残留问题及治理对策[J].植物医生，2001，14（3）：10-13.

[5]富恩承.出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定[S].SN/T0001-1995.

[6]刘伟，吴文君，于福利，等.霜霉威盐酸盐的分析方法[J].农药分析，2009，48（3）：193-196.

[7]刘芳芳.黄瓜种质资源低农药残留性评价[D].哈尔滨：东北农业大学，2008.