小陷胸汤加味方对兔心肌缺血再灌注损伤的干预*

王 颖 霍淑杰 刘玉洁

急性心肌梗死属于中医学“胸痹”、“真心痛”范畴。目前，中医药作为急性冠脉痉挛、心脏介人术后的后续治疗手段正逐渐得到广泛应用。小陷胸汤是临床常用方，具有清热化痰、宽胸散结的功效。本实验旨在观察小陷胸汤加味方预处理对心肌缺血再灌注损伤髓过氧化物酶（MPO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）的干预，探讨其在心肌缺血再灌注中的作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 （1）试剂与仪器：MPO试剂盒（南京建成生物工程研究所）、TNF-α（解放军总医院科技开发中心放免所）、CRP测定试剂盒（上海科华生物工程股份有限公司）。台式高速离心机（TDL-4，上海安亭科学仪器厂）、721分光光度计（江苏无锡柯达智能仪器厂）、电子称、电热恒温水浴箱（常州国华电器有限公司）、ECG-6511单导心电图机（上海汇丰医疗器械有限公司）。（2）动物：新西兰大耳白兔，体质量2～2.5kg/只，雄性，屏障环境喂养，自由进食，由华北煤炭医学院动物实验中心提供，许可证编号：scxk（京）2006-0005。（3）药物：小陷胸汤加味方，组方：瓜蒌 30g，半夏 12g，黄连 6g，丹参 15g，海藻 10g，大黄 5g。采用广东一方制药有限公司生产的中药配方颗粒（相当于生药饮片剂量）。

1.2 分组及造模 （1）动物分组：32只兔随机分为假手术组、模型组、小陷胸汤加味方低剂量组、小陷胸汤加味方高剂量组，每组8只。（2）给药方法：根据人兔临床用药剂量换算公式[1]换算成兔用药量，将中药颗粒用生理盐水混匀，按小陷胸汤加味方高剂量 6.32g/（kg·d），小陷胸汤加味方低剂量 3.16g/（kg·d），于术前5d灌胃给药。假手术组及模型组给予等量生理盐水术前5d灌胃。（3）造模方法：取兔，称重。用20%氨基甲酸乙酯按5mL/kg腹腔注射麻醉，仰卧，固定，8%硫化钠进行四肢及胸部脱毛。四肢接标准肢体Ⅱ导联心电图。沿胸骨正中线剪开皮肤，沿胸骨左缘剪断3～5肋软骨，小心剪开心包，切勿将胸膜破坏，开胸器打开切口，暴露心脏，用浸生理盐水的棉棒旋转心脏，在左心耳下缘0.5cm处寻找冠状动脉，以5/0号线在左心耳下方2～3cm处用小圆针（3/8，3×10规格）穿过静脉下心肌，连同心大静脉，打双活结结扎左冠状动脉前降支，30min后打开结扎线实现再灌注，再灌注120min后结束实验。假手术组只穿线不结扎，以ST段抬高、缺血区域心肌颜色变暗为模型成功标志。成功标准：ST段抬高，T波倒置；结扎区以下心肌颜色变成暗红色。失败标准：心电图无变化，心肌颜色无变化，家兔死亡。（4）取材及测定：灌注结束时于右心房取血5mL，按照说明书方法分离血清，置于-20℃冰箱保存备用。免疫组织化学及生化法测定MPO，放射免疫法测定TNF-α，免疫比浊法检测CRP。实验结束时，迅速取出心脏，以结扎线为标准，剪取缺血区左心室前壁心肌1g，按说明书方法制作成10%组织匀浆，各指标均严格按照说明书方法检测。

1.3 统计学处理 应用SPSS15.0统计软件。计量资料以（±s）表示，采用LSD法。

2 结果

2.1 各组MPO活性比较 见表1。可见模型组、小陷胸汤加味方低、高剂量组MPO活性均较假手术组升高（P＜0.01），均比模型组MPO活性降低（P＜0.05或0.01），低、高剂量组之间相近（P ＞ 0.05）。

2.2 各组TNF-α水平比较 见表1。可见模型组、小陷胸汤加味方低、高剂量组TNF-α水平均较假手术组升高（P＜0.01），低、高剂量组均比模型组TNF-α水平降低（P ＜0.05），低、高剂量组相近（P＞0.05）。

2.3 各组CRP水平比较 见表1。可见模型组，小陷胸汤加味方低、高剂量组CRP水平均较假手术组升高（P＜0.01），均比模型组CRP水平降低（P＜0.05），低、高剂量组相近（P＞0.05）。

表1 各组MPO活性、TNF-α及CRP水平比较

3 讨论

心肌缺血最有效的治疗措施是恢复血液供应。缺血后恢复血流供应的过程称为再灌注。再灌注可使缺血心肌损伤加重[2]，即产生心肌缺血再灌注损伤。心肌缺血再灌注损伤有多种因素参与。基础研究表明MPO、TNF-α及CRP参与了心肌缺血再灌注损伤的发生[3～7]。

心肌缺血再灌注损伤，属于中医学“胸痹、心痛”、“真心痛”范畴。早在《内经》时代，医家就已提出胸痹的重证“真心痛”以“阴气在中”为病机。缓解期多见气血阴阳虚损，发作期则以瘀血、痰浊、气滞、寒凝为主。《伤寒论》中指出“小结胸病，正在心下，按之则痛，脉浮滑者，小陷胸汤主之”；程扶生在《古今名医方论》中指出“以半夏之辛散之，黄连之苦泻之，栝蒌之苦润涤之，所以除热散结于胸中也”。方中瓜蒌为君，清热化痰，通胸膈之痹；黄连为臣，泻热降火，半夏化痰降逆，二药相配，辛开苦降，化痰散结，通畅气机。佐以丹参凉血化瘀，辅以海藻以散顽结，使大黄既清热解毒又化瘀散结，使热毒从大便而出，谓邪有出路也。药理研究也表明，丹参可通过多种途径减轻心肌缺血再灌注损伤[8，9]。临床中也观察到许多冠心病患者发病时或冠状动脉搭桥术、经皮冠状动脉内成形术后常常出现胸痛、胸闷、憋气、发热、心悸、烦躁不安、大便不畅，舌质暗红，舌苔黄腻、或黄燥，脉象多滑数、弦数等症，在使用小陷胸汤加味方后冠心病患者症状和理化指标得到有效改善，收到满意疗效[10]。

MPO是中性粒细胞嗜天青颗粒产生的一种重要的过氧化物酶，主要存在于嗜中性粒细胞和单核细胞中[10]。MPO也是一种血红素蛋白，可作为中性粒细胞的特异性标记物[12]，即一种新的心肌标志物，所以用药物治疗来尽量减轻再灌注损伤，部分依赖于减少中性粒细胞的浸润。在临床中证实急性心肌梗死患者血浆中TNF-α含量在发病早期即显著升高[13]，而再灌注是TNF-α升高的主要原因[14]。大量研究表明，心肌缺血能够引起急性炎症反应，在再灌注后进一步加剧，导致不可逆的细胞损伤。CRP是人体非特异性炎症的最敏感的标志物之一，是一种γ球蛋白，在正常人血清中的含量极微，一般少于10mg/L，但在急性炎症反应阶段其含量可迅速增加1000多倍，血清CRP含量的高低与疾病的炎症反应程度关系密切[15]。本实验提示，小陷胸汤加味方可降低兔心肌缺血再灌注MPO的活性及TNF-α、CRP的含量。这可能是通过减轻炎症反应达到保护缺血再灌注心肌的作用。可见小陷胸汤加味方对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。

MPO、TNF-α及CRP在心肌缺血再灌注过程中发挥了重要作用，引起越来越多的关注，已经逐渐成为治疗的新途径。本实验发现，小陷胸汤加味方预处理可以通过减轻炎症反应而起到保护缺血再灌注心肌的作用，但心肌缺血再灌注的确切发病机制尚未完全阐明，因此该药发挥作用的其他途径尚需进一步研究。

[1]陈奇.中药药理研究方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2006：1167～1170.

[2]Kupall C，Habaze H，Zablers，et al.ACE-inhibition prevents post ischemic coronary leukocyte adhesion and leukocyte-dependent reper fusion injury[J].Cardiovasc Res，1997，36（3）:386.

[3]Daugheay A，Dunn JL，RateriDL，etal.Myeloperoxidase，a catalyst for lipo protein oxidation，isexpressed in human atherosclerotic lesions[J].JClin Invest，1994，94（1）：437 ～ 444.

[4]Sugiyama S，Okada Y，Sukhova GK，et al.Macrophagemy— eloperoxidase regulation by granulocyte macrophage colony—Stimulating factor in human atherosclerosis and implications in acute coronary syndromes[J].Am JPathol，2001，158（3）：879 ～ 891.

[5]徐世安，朱兵，陈晓慨，等.大鼠心肌缺血再灌注损伤中肿瘤坏死因子的实验研究[J].中国医科大学学报，2003，32（6）:488～492.

[6]王弘道 缪文丽于丽萍.灯盏细辛注射液联合复方极化液对急性心肌梗死患者再灌注损伤的影响 [J].黑龙江中医药，2002，31（5）:9～10.

[7]马今.不稳定型心绞痛病理生理学研究进展 [J].心肺血管病杂志，1999，18（2）：159.

[8]王怡，王少峡.首乌丹参方预处理对IR大鼠心肌梗死范围及血中TNF-α、IL-1β 的影响[J]. 四川中医，2007，25 （1）:7.

[9]曹鲁豫.中西医结合治疗冠心病心绞痛54例 [J].四川中医，2007，25（2）：65.

[10]郝幼敏，刘玉洁.中药解毒通络法对急性心肌梗死患者C反应蛋白的干预[J]. 四川中医，2007，25（2）：64 ～ 65.

[11]吴越，王典，于晓军.髓过氧化物酶及其多态性与疾病的研究进展[J]. 免疫学杂志 .2005，21（3）:89 ～92.

[12]Del GJ，Garcia JI-I.Polymorphonuelear leukocyte adhesion in eerebrovascular ischemia：Pathophysiologie implications of leukocyte-4 adhesion[M].Oxford：Oxford University Press，1995：408 ～ 425.

[13]刘丁，赵丽.急性心肌梗死患者肿瘤坏死因子的动态变化[J].中华内科杂志，2000，39 （7）:499.

[14]丁文惠，吴付轩，李大元，等.肿瘤坏死因子在心肌缺血再灌注中的变化和意义[J].中国介入心脏病学杂志，1998，6（2）:51～54.

[15]李十红，李祥国.左室舒张功能障碍的中医研究进展 [J].中国中西医结合杂志，1997 ，17（9）:571～572.