不同猪瘟免疫程序对仔猪母源抗体水平的影响

吴家强 ，张学武 ，李 俊 ，徐绍建 ，李 坤 ，于 江 ，刘 洋 ，周 顺 ，王金宝

（1.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东 济南 250100；2.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东 济南 250100；3.诸城市畜牧兽医管理局，山东 诸城 271000；4.青岛农业大学，山东 青岛 266109）

猪瘟（HC），又称古典猪瘟（CSF），俗称“烂肠瘟”，是猪的一种高度接触传染性病毒病，在世界上许多养猪的国家都有流行[1]。由于其传播快、病死率高，给养猪业带来严重的经济损失，因此，受到世界各国的高度重视。疫苗免疫接种是防治猪瘟积极有效的措施之一。我国研制的猪瘟兔化弱毒细胞苗具有性能稳定、安全性好、免疫原性强的优点，是消灭和控制猪瘟的有力武器[2-4]。另外，近年来我国又研制成功猪瘟脾淋苗（兔源），其优点是抗原含量足、产生保护力快，而且在生产过程中能够避免牛病毒性腹泻病毒（BVDV）污染。仔猪通过胎盘或乳汁（尤其是初乳）从母体获得的抗体称为母源抗体。猪瘟母源抗体的存在，一方面能够保护新生仔猪避免早期感染，但另一方面却又在很大程度上干扰仔猪的猪瘟疫苗免疫效果，造成免疫失败[5-8]。本研究旨在对应用不同猪瘟免疫程序的猪场进行仔猪母源抗体水平检测，为猪场猪瘟免疫程序的制定尤其是仔猪首免日龄的确定提供参考建议。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验猪场与试验动物

选择山东4个规模化猪场:A场存栏227头母猪，B场存栏153头母猪，两场均使用猪瘟脾淋苗；C场存栏540头母猪，D场存栏312头母猪，两场均使用猪瘟细胞苗。选取每个猪场各5头母猪及其所产的201头仔猪为试验动物，仔猪品种均为杜长大三元杂交猪。试验日龄为仔猪出生后第5天至第50天，试验期间仔猪不注射猪瘟疫苗，按照免疫程序正常防疫猪气喘病、副猪嗜血杆菌、伪狂犬病、猪蓝耳病、口蹄疫等商品化疫苗。

1.1.2 猪瘟疫苗类型与使用方法

猪瘟脾淋苗由上海某生物制品厂家提供，产品批号为20090818，20头份/瓶；猪瘟细胞苗由山东某生物制品厂家提供，产品批号为0907026，50头份/瓶。疫苗于-20℃冷冻保存，母猪免疫使用方法见表1。

?

1.1.3 检测试剂与仪器

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒购自武汉科前动物生物制品有限责任公司；酶标分析仪购自深圳雷杜生命科学股份有限公司，机器型号为RT-6100。

1.2 方法

1.2.1 试验仔猪临床观察

每天观察试验仔猪的精神状态、食欲、粪便等有无异常状况，从第20日龄起，饮水中定期添加电解多维、葡萄糖和小苏打，以减轻保定、采血、打针等造成的仔猪应激反应。

1.2.2 采血与抗体检测

在仔猪5日龄、10日龄、20日龄、30日龄、40日龄、50日龄时分别前腔颈静脉采血3mL，4000 r/min离心3min，分离血清，于-20℃冷冻保存。全程采血结束后，通过猪瘟抗体ELISA抗体检测试剂盒集中进行抗体检测。

1.2.3 样品阳性或阴性判断标准

在酶标仪上检测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性血清对照孔OD630值大于或等于1.0，阴性血清对照孔OD630值必须小于0.3。样品OD630值大于0.35（相当于间接血凝试验效价1:16），判为猪瘟抗体阳性；样品OD630值小于0.35，判为猪瘟抗体阴性。

2 试验结果

2.1 仔猪生长发育的临床观察

A、B、C、D四个猪场的试验仔猪在哺乳期间共有12头因为弱仔、挤压或腹泻致死，保育期间因为腹泻、瘦弱等原因淘汰6头，其它试验仔猪精神状态良好，体温、食欲正常，试验期间未见不良反应。

2.2 母源抗体检测结果

对应用不同猪瘟免疫程序的四个猪场进行检测发现，在20日龄以内仔猪母源抗体的平均OD630值（0.503～1.587） 和阳性率 （62.2%～95.7%）均维持较高的水平，仔猪能够获得较好的母源抗体保护，避免猪瘟病毒的早期感染。随着日龄增长，仔猪母源抗体逐渐下降，尤其在断奶后一周（30～40日龄）下降趋势最为显著。但D场的仔猪母源抗体在40日龄以后又出现反弹，抗体阳性率从13.3%升高至37.8%（见表2）。

?

3 结论与讨论

猪瘟病毒属黄病毒科、瘟疫病毒属，基因组为单股线状的RNA，与牛黏膜病病毒、羊边界病病毒有共同的抗原。猪瘟病毒可以划分为三个基因型（Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型），我国猪瘟病毒的流行毒株属于基因Ⅱ型，占80%以上，而使用比较广泛的猪瘟兔化弱毒疫苗毒株属于基因Ⅰ型，各个基因型之间存在交叉免疫保护作用[1]。在我国，随着猪瘟疫苗的推广应用，特别是国家实施强制性免疫以来，猪瘟的防控取得了很大成效和进步。但也不可否认，由于不同生物制品厂家生产的猪瘟疫苗质量（生产工艺、抗原含量、外源病原污染、质检标准等）参差不齐，冷链运输和保存环节不健全，疫苗免疫程序不合理，猪瘟疫苗免疫失败的现象仍然时有发生，给本病的综合防治造成很大障碍[9-10]。建议国家相关部门加大生物制品的检查力度，改进免疫监测方法[11]，提高售后服务质量（包括冷链运输和配送），杜绝不合格疫苗产品的市场准入和流通，保障猪瘟等生物制品的免疫效果。

另外，在本研究中也发现，断奶行为对仔猪的应激反应除了体现在饮食改变、合群打架、环境适应性等方面，还表现在断奶前后母源抗体的变化非常显著，这也能够从一个侧面解释为什么仔猪断奶后疾病多发的原因。试验中的四个猪场，仔猪均于25～28日龄断奶，由于离开母猪失去了母源抗体来源，仔猪在30～40日龄母源抗体的下降幅度非常大，已基本接近或低于临界值。如果此时不及时进行免疫接种，将出现免疫空白期，对猪瘟野毒无抵御能力。D场仔猪40～50日龄的猪瘟抗体水平不继续降低反而升高，恰恰说明此时仔猪遭受了猪舍环境中的猪瘟野毒侵袭，应当引起养猪生产管理者的重视。

疫苗的免疫接种，对防制猪瘟至关重要，在养猪生产中母猪群有两种常见的猪瘟免疫程序。（1）普遍防疫（普防）:每年普防3次，每4个月免疫一次，每头母猪每次接种2头份猪瘟脾淋苗或3头份细胞苗。此法主要在一些大型种猪场应用，优点是便于在短时间内集中猪场的人力、物力进行防疫，提高猪瘟的防疫密度，但个别母猪怀孕期间注射猪瘟弱毒疫苗出现过敏反应，有流产现象发生。（2）跟胎次免疫:在一些种猪场和许多中小规模猪场，通常于母猪产后21天左右接种猪瘟疫苗，由于产后消耗和仔猪吸吮等原因，此时母猪自身的抗体水平呈下降趋势，接种疫苗后可获得较好的免疫效果，而且按此法接种母猪不易漏防。本研究结果显示，母猪采用不同免疫程序的猪场，其所产仔猪的猪瘟母源抗体持续时间不完全等同。母猪免疫状况一般的猪群（譬如D场），仔猪20日龄时，其猪瘟母源抗体的平均OD630值和阳性率已接近临界值，此时应及时进行猪瘟疫苗免疫，以免出现猪瘟抗体空白期。母猪免疫较好的猪群（譬如B场），仔猪30日龄时，其猪瘟母源抗体的平均OD630值仍维持在0.68，抗体阳性率达80%以上，对猪瘟野毒具有较强的防御能力。如果此时注射猪瘟疫苗，将受到母源抗体的干扰而导致免疫失败。因此，建议规模化猪场定期开展母源抗体监测工作，以抗体阳性率接近70%、平均OD630值0.35～0.45（相当于间接血凝试验效价1:16～1:32），作为仔猪的猪瘟首免日龄（见表2），制定科学合理的个性化猪瘟免疫程序，以确保猪瘟疫苗免疫质量。

[1]涂长春.猪瘟国际流行态势、我国现状及防制对策 [J].中国农业科学，2003，36（8）:955-960.

[2]Biront P，Leunen J I，Vendeputte J.Inhibition virus replication in the tonsils of pigs previously vaccinated with a Chinese strain vaccine and challenged oronasally with a virulent strain of classical swine fever virus[J].Vet Microbiol，1987，14(2):105-113.

[3]仇华吉，童光志，沈荣显.猪瘟兔化弱毒疫苗--半个世纪的回顾[J].中国农业科学，2005，38（8）:1675-1685.

[4]丘惠深，郎洪武，王在时.猪瘟病毒野外分离物的研究IV猪瘟兔化弱毒疫苗与我国近年猪瘟野毒的免疫保护相关性实验 [G]//中国兽药监察所研究报告汇编（1995～1999），14:50-53.

[5]江明甫，杨红，杨晓丹.猪瘟免疫程序筛选优化研究 [J].现代畜牧兽医，2008（1）:29-30.

[6]孔德江，易栋，柴保平，等.仔猪猪瘟首免日龄与疫苗剂量测定的小样本试验[J].猪业科学，2009，26（8）:77-79.

[7]林毅，冯金传，张道永，等.规模化猪场4种猪瘟免疫程序的免疫效果比较 [J].中国兽医科技，2000，30（4）:20-21.

[8]张新成，李官兵，史子学.猪瘟母源抗体在仔猪体内持续时间的研究[J].养猪，2008（1）:46-48.

[9]孙伟，杨瑛，王平荣，等.猪瘟免疫程序及其免疫效果研究[J].畜牧与兽医，2003，35（6）:28-30.

[10]宁宜宝，王琴，丘惠深，等.猪瘟病毒持续感染对母猪繁殖性能及仔猪猪瘟疫苗免疫效力的影响[J].畜牧兽医学报，2004，35（4）:449-453.

[11]ColijnE O，BloemraadM，Wensvoort G.An improved ELISA for the detection of serum antibodies directed against classical swine fever virus[J].Vet Microbiol，1997，59（1）:15-25.