蜂胶抗动脉粥样硬化作用的研究进展*1

袁 娜 王家富 黄庆玉

(泰山医学院，山东 泰安 271016)

蜂胶是广为熟知的被广泛应用于保健食品的一种物质,是蜜蜂从植物幼芽或受伤树干上采集树脂,并混入上腭腺分泌物和蜂腊后，经咀嚼加工而成的一种粘稠胶状物质[1]。

蜂胶中含有大量的生物活性物质和微量元素,主要包含5大类成分:树脂、树胶约占50%～55%,蜂胶约占30%,挥发油约占10%,花粉约占5%,各种有机酸和矿物质约占5%[2]。目前已从蜂胶中分离鉴定出的成分有黄酮类、萜烯类、醌类、酯类、醇类、酚类、醚类、有机酸和大量氨基酸、酶类、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素E和维生素A 以及矿物质等。近年来国内外对蜂胶的研究取得很大进展,使得蜂胶的应用也越来越广泛。它的抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、调节血脂等方面的作用也越来越受到人们的关注。现将蜂胶抗动脉粥样硬化相关研究作一综述。

1 调节血脂水平

血脂是血液中脂肪的总称,主要指血中的胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)。高血脂是动脉粥样硬化形成的主要原因,血液中长期过高的胆固醇、甘油三脂，使得血管壁上过多的脂类容易被自由基氧化,形成脂质过氧化物质, 沉积在血管壁上,从而导致动脉粥样硬化。血清中TC、TG 及低密度脂蛋白(LDL-C) 含量升高和高密度脂蛋白(HDL-C) 含量降低是诱发动脉硬化和导致心脑血管疾病的重要因素, 高LDL-C 血症是动脉粥样硬化的易患因子, 其在血浆中的浓度与动脉粥样硬化的发生率呈明显的正相关。大量研究证明蜂胶醇提液和水提液均能有效抑制高脂血症SD大鼠血清中的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT ) 的升高, 并且能有效抑制肝脏组织中的TC、TG、丙二醛(MDA) 的升高, 但对血清中的高密度脂蛋白(HDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA )、一氧化氮(NO ) 的影响不明显; 蜂胶醇提液能有效降低高脂血症SD 大鼠的体重、肝重及肝指数, 表明蜂胶能够改善高脂血症大鼠的脂质代谢[3]。通过分离结扎大鼠胆总管进行成功造模后，观察蜂胶对肝脏形态学变化，发现蜂胶组大鼠肝细胞扩大，胆小管扩张，肝脏水肿情况减轻，坏死肝细胞数目及清除比例增加[4]。蜂胶降低血脂机理尚未完全阐明，可能是与胆固醇或其转化物胆酸结合，从而抑制其在肠内的吸收，促进降解和排泄而起到调节血脂的作用，或与提高脂类代谢相关酶活性有关。

2 对内皮细胞的作用

各种原因造成的动脉内膜损伤是动脉粥样硬化病变发生的关键因素。内皮细胞功能障碍可以引发一系列变化,从而促进动脉粥样硬化的发生发展。张云香等[5]在一定浓度的肿瘤坏死因子-α诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的模型实验中，加入不同浓度的蜂胶水提液，用流式细胞仪和缺口末端标记技术TUNEL检测细胞凋亡率，实验结果为模型组内皮细胞凋亡率均明显高于对照组,不同浓度蜂胶组内皮细胞凋亡率明显低于模型组。从而发现蜂胶对血管内皮细胞起到一定的保护作用。乔松素亦称松属素，是蜂胶黄酮类成份中含量较高的一种，约为1.7%～2.8%，属于双氢黄酮类。李东娟等[6]培养人脐静脉内皮细胞, 建立脂多糖损伤模型，光镜下观察细胞形态, MTT 法观察乔松素对人脐静脉内皮细胞活性的影响, ELISA 方法检测培养上清中血管假血友病因子的含量, TUNEL 法检测细胞凋亡率。发现乔松素能增强人脐静脉内皮细胞活性, 抑制脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡, 从而发挥可能的内皮细胞保护功能。乔松素还能够通过一氧化氮环化鸟苷酸(NO-cGMP) 和开放钾离子通道封锁钙离子通道，从而引起小鼠动脉环舒张[7]。然而有其他学者[8]研究发现黄酮类中不同结构的化合物，这些化合物对血管内皮细胞形成管型具有抑制作用，咖啡酸乙酯的血管抑制作用最强，并且这些物质具有的抗生成血管性质与抗氧化性有相关性，即抗生成血管性质强，反而该化合物的抗氧化能力相对要弱。

3 调节炎症介质作用

多种炎性介质参与动脉粥样硬化的病变形成。致炎因子首先引起内皮细胞的功能障碍,从而引起一系列有大量炎性介质参与的炎性反应。许多研究证实蜂胶具有抗炎症的作用。抗炎性质源于黄酮类物质对致炎因子的抑制作用。高良姜黄素可以抑制环氧化酶、脂氧合酶 、聚半乳糖醛酸酶的活性，降低了环氧化酶2的表达。咖啡酸乙酯通过阻止细胞膜花生四烯酸的释放达到抗炎特性。花生四烯酸可以抑制环氧化酶1和2的活性[9]。基质金属蛋白酶(MMP)对细胞的迁移、侵袭、活化及动脉粥样硬化的形成、血管重塑等均起重要作用。动脉粥样硬化斑块形成的早期,循环中的单核细胞和血小板黏附于损伤的内膜下,释放大量的细胞因子和生长因子,刺激血管平滑肌细胞增殖并分泌细胞外基质,同时又刺激平滑肌细胞和内皮细胞合成基质金属蛋白酶,以促进细胞摆脱细胞基质的束缚,然后进行迁移。细胞增殖和细胞外基质的沉积以及基质金属蛋白酶引起的细胞外基质降解之间失去平衡,最终导致斑块形成。MMP-9 主要由单核巨噬细胞、中性粒细胞、成纤维细胞分泌产生。采用荧光电泳法,检测不同葡萄糖浓度和不同蜂胶浓度处理的体外培养的人成纤维细胞及单核巨噬细胞系的基质金属蛋白酶MMP-9 蛋白的表达，发现蜂胶可抑制这些细胞MMP-9 的表达, 并呈剂量依赖性，有益于细胞基质的积聚,从而有益于伤口的愈合[10]。核因子(nuclear factor kappa B,NF-κB )是一种重要的炎症转录因子, 许多炎症基因的表达是通过NF- κB的活化来实现的。在动脉粥样硬化病变部位，血管平滑肌、血管内皮细胞内均可见NF-κB的激活现象，后者的NF-κB异常激活被认为是AS的始动机制之一[11]。利用载脂蛋白E基因敲除小鼠模型，研究证明咖啡酸苯乙酯可以抑制NF-κB，在高胆固醇血症下也能阻止动脉粥样硬化的发生发展，并且没有不良反应。咖啡酸苯乙酯同样可以减少在大动脉NF-κB相关基因产物如TNF-α、 IL-2、 血小板源性生长因子( PDGF-BB)和 E-选择素表达,以及NF-κB下游相关分子产物的激活。从而说明咖啡酸苯乙酯可以通过NF-κB和氧化应激，来达到治疗动脉粥样硬化的目的[12]。

4 抗氧化作用

蜂胶乙醇提取液具有明显的抗氧化功能， 主要原因就是由于蜂胶中黄酮类化合物与超氧阴离子反应， 阻止自由基反应的引发， 或与铁离子鳌合阻止羟基自由基的生成，或与脂质过氧化基反应阻止脂质过氧化过程等途径。用分光光度计测定蜂胶水提液对脐动脉平滑肌细胞过氧化物歧化酶活性(SOD)及丙二醛(MDA)含量的影响，结果显示蜂胶水提液组SOD活性较对照组有显著性差异，高浓度的蜂胶水提液能减少MDA的生成[13]。 咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester，CAPE)是蜂胶中分离的一种活性成分，研究发现CAPE可以显著降低MDA含量，提高SOD、过氧化氢酶 (CAT)活性，对谷胱甘肽过氧化酶 (GSH-Px)活性显著提高。说明蜂胶可以清除氧自由基，对抗脂质过氧化和一些参与氧化反应的酶活性具有作用[14]。阿魏酸、咖啡酸和二咖啡醇喹尼酸等含有酚羟基的有机酸可消除自由基,抑制氧化反应和自由基反应,具有保护肝细胞和抗肝脂质过氧化作用。糖类中的果糖也有明显的抗氧化作用。蜂胶中众多的其他类化合物均有抗氧化作用,可能比已知的抗氧化物维生素C和维生素E 更加具有潜力[15]。中国蜂胶和巴西蜂胶有抑制大鼠体内黄嘌呤氧化酶活性的作用,但是中国蜂胶作用更明显[16]。在糖尿病大鼠模型中检测咖啡酸苯乙酯对大脑氧化应激和炎症反应的影响，发现其能够显著降低一氧化氮和丙二醛的含量，以及过氧化氢酶和过氧化物酶黄嘌呤氧化酶在大脑的含量，升高谷胱甘肽的含量，降低肿瘤坏死因子-α和干扰素、一氧化氮的含量[17]。

5 调节血小板作用

近年来研究发现动脉粥样硬化的发生与血管内皮损伤，血小板黏附、聚集和血栓形成密切相关。血小板在动脉粥样硬化的发病过程中起重要作用[18]。张云香等[19]采用体外灌注法,用纤维蛋白原和人Ⅱ型胶原蛋白包被盖玻片,复制血管内膜创伤模型,正常血液流经纤维蛋白原和胶原膜表面后,测量血小板粘附率。浓度为0.1 g/L的24%乙醇蜂胶提取液作实验组,加入24%的乙醇作阴性对照组,同浓度的阿魏酸乙醇溶液作阳性对照组，结果发现蜂胶乙醇提取液能抑制血小板的活化,降低其在纤维蛋白原和胶原蛋白膜表面的粘附活性,对血小板与纤维蛋白原的作用更明显。咖啡酸苯乙酯也可以抑制胶原暴露引起血小板聚集，对血小板ATP释放也有抑制作用[20]。蜂胶醇提物和蜂胶醚提物及其成分咖啡酸苯乙酯,在鸡胚尿囊绒膜和肺动脉内皮细胞增生试验中的抗血管新生活性,三者抑制鸡胚尿囊绒膜的血管新生和平滑肌细胞的增殖[21]。

6 对平滑肌细胞和巨噬细胞的作用

血管平滑肌细胞向内皮迁移,由收缩表型转变为合成表型并大量增殖，是高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病的主要病理基础。探讨蜂胶水提液对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖作用的影响时发现，血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖,氯沙坦能阻滞该作用，一定浓度的蜂胶水提液可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞的增殖,其机制可能与限制细胞由G1期向S期转变及增殖细胞核抗原的表达有关[22]。蜂胶能使炎症早期巨噬细胞的活性升高 ，活化的巨噬细胞又能清除血管内氧化修饰的脂蛋白从而起到防御动脉粥样硬化功能。但巨噬细胞的过度活化会产生细胞因子,进而活化T淋巴细胞，激活补体系统,诱导巨噬细胞转化为泡沫细胞[23]。正常情况下巨噬细胞分泌很少的白细胞介素1和一氧化氮，但脂多糖可以诱导巨噬细胞分泌白细胞介素1和一氧化氮合成酶mRNA增多，蜂胶黄酮类物质可以减少脂多糖导致的巨噬细胞合成分泌功能，降低炎症反应[24]。蜂胶中的黄酮类成分，也抑制核转录因子的表达，从而引起致炎细胞因子降低,诱导巨噬细胞的凋亡。

许多学者已经开始从分子基因水平来揭示蜂胶抗动脉粥样硬化的作用机制,但蜂胶抗动脉粥样硬化的细胞分子学机制十分复杂,涉及到其调节血脂的作用；保护血管内皮细胞结构和功能的完整性; 调节巨噬细胞吞噬和分泌，抑制血管平滑肌细胞异常增殖和迁移;影响生长调节因子和细胞因子的合成和释放等多个环节。现在大量的研究表明蜂胶具有广泛的生理及药理活性 ,开发前景极为广阔。随着对蜂胶成分及功能研究的深入，其生物学作用将得到不断的探索发现。

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