高效液相色谱法测定盐酸度洛西汀中1-萘酚的含量

丁云晖 郭圣荣

上海交通大学药学院 （上海 200030）

高效液相色谱法测定盐酸度洛西汀中1-萘酚的含量

丁云晖 郭圣荣

上海交通大学药学院 （上海 200030）

建立一种适用于测定盐酸度洛西汀中1-萘酚的测定方法。色谱柱为Agilent C18柱（5μm，4.6mm×250mm）；磷酸盐缓冲溶液（pH=5.8）-乙腈（63∶37）为流动相；检测波长为 230 nm；柱温为 30℃；流速1.0mL/min；进样体积为10μL。样品中盐酸度洛西汀和1-萘酚分离度良好，1-萘酚的最低检测限为0.132 ng。所建立的方法简便、快速，可准确地分离盐酸度洛西汀中的1-萘酚，并能有效监控产品中的主要有关物质。

盐酸度洛西汀 1-萘酚 有关物质 高效液相色谱法

盐酸度洛西汀是一种安全、有效和优先选用的抗抑郁药，化学名为(S)-(+)-N-甲基-3-（1-萘氧基）-3-（2-噻吩基）-丙胺盐酸盐，在酸性环境中不稳定、易分解而产生降解产物。目前采用高效液相色谱法（HPLC）检测盐酸度洛西汀原料或制剂的含量和有关物质[1-2]，其中1-萘酚是盐酸度洛西汀中的主要杂质，由于1-萘酚具有生理毒性，对其进行分析检测和控制是必要的。目前检测1-萘酚的一般方法有光谱法、高效液相色谱法、气相色谱法和示差脉冲伏安法等[3-7]。

本测试对盐酸度洛西汀进行相关研究，建立了高效、适用的HPLC分析方法，用于测定药品中1-萘酚的含量，为有效监控产品中的有关物质提供了较好的分析检测手段。

1 仪器与试剂

全自动高效液相色谱仪：Aglient1200型，包括四元泵、自动进样器、柱温箱、DAD检测器、Agilent色谱工作站；

电子天平：梅特勒AE240；

乙腈：色谱纯；

水：重蒸水；

其他试剂分析纯；

盐酸度洛西汀：对照品供含量测定用，由上海万代制药有限公司提供，批号为060501；

1-萘酚：对照品供含量测定用，国药化试，批号为200803；

盐酸度洛西汀片：由上海中西制药有限公司研究所提供，批号 S091201、S091202、S091203，规格为每片含度洛西汀30mg。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为AgilentC18柱（5μm，4.6mm×250 mm）；磷酸盐缓冲溶液（pH=5.8）－乙腈（63∶37）为流动相；检测波长为230 nm；柱温为30℃；流速1.0 mL/min；进样体积为10μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液

分别精密称取盐酸度洛西汀对照品、1-萘酚对照品适量，加流动相制成盐酸度洛西汀浓度为35 μg/mL和1-萘酚浓度为0.2μg/mL的混合溶液即得。

2.2.2 供试品溶液和自身对照溶液

精密称取盐酸度洛西汀肠溶片的细粉适量（含量约相当于盐酸度洛西汀33.6mg），置100mL量瓶中，加流动相适量，振摇使盐酸度洛西汀溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤后，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1mL上述供试品溶液置100mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。

2.3 系统适用性

取2.2.1对照品溶液，注入液相色谱仪，盐酸度洛西汀和1-萘酚的相对保留时间分别为4.443和11.844，理论塔板数分别为6 100与12 000，两者能达到有效分离。

2.4 专属性

取盐酸度洛西汀对照品约35mg共6份，分别依次加入20%过氧化氢溶液适量，80℃水浴1 h，放冷，用流动相稀释后作为氧化降解样品溶液；加入0.1 mol/L盐酸溶液适量，80℃水浴加热15min，放冷，调节pH至中性，用流动相稀释后作为酸降解样品溶液；加入重蒸水50mL，80℃水浴2 h，放冷，用流动相稀释后作为水降解样品溶液；加入1mol/L氢氧化钠溶液适量，80℃水浴2 h，放冷，调节pH至中性，用流动相稀释后作为碱降解样品溶液；放置80℃烘箱内7 d，用流动相稀释后作为高温降解样品溶液；放置于光照强度1 200 000 Lx下7 d，用流动相稀释后作为强光照降解样品溶液。取上述降解样品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1～图6，可见此色谱条件可检测出降解产物，降解峰和主成分峰能有效分离。

2.5 线性

分别精密称取盐酸度洛西汀对照品和1-萘酚对照品适量，以流动相制成分别含盐酸度洛西汀8.5、16.9、25.1、33.9、41.6、50.2、58.2 μg/mL 和含 1- 萘酚0.066 7、0.101、0.133、0.172、0.202、0.233、0.267 μg/mL的混合溶液，注入液相色谱仪中，记录色谱图，试验结果见表1。

2.6 检测限

取流动相注入液相色谱仪，噪音值为0.033mAU。精密称取1-萘酚对照品11.0mg，用流动相稀释至1.1 μg/mL，作为供试品溶液（1），注入液相色谱仪，溶液中的1-萘酚的信号值为8.7mAU。将供试品溶液（1）依次稀释，注入液相色谱仪，当信噪比为3∶1时，测得本方法对1-萘酚的检测限为0.132 ng。

2.7 校正因子

取2.5项下溶液，依次注入液相色谱仪，记录色谱图，测量盐酸度洛西汀和1-萘酚的峰面积，按下式计算校正因子（f），结果见表2。

校正因子（f）＝（As/Cs）/（Ar/Cr）

式中：As为1-萘酚的峰面积；

Ar为盐酸度洛西汀的峰面积；

表1 线性试验测定结果汇总表

Cs为1-萘酚的浓度；Cr为盐酸度洛西汀的浓度。

表2 校正因子测定结果汇总表

2.8 有关物质的测定

取2.2.2自身对照溶液10μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%。再精密量取供试品溶液与自身对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，计算杂质峰峰面积占对照溶液主峰峰面积的百分比。

2.9 样品的测定

取盐酸度洛西汀肠溶片（批号S091201、S091202、S091203），分别按本文方法测定1-萘酚和有关物质的含量，结果见表3。

表3 三批样品1-萘酚和有关物质测定结果汇总表

3 讨论

（1）盐酸度洛西汀在氧化、强酸、湿热条件下容易降解；在强碱、高温、光照条件下相对比较稳定，所有试验产生的降解产物与主峰的分离度均大于1.5。

（2）本色谱条件系统适用性、精密度、专属性、线性、溶液稳定性均良好，可用于测定盐酸度洛西汀原料和制剂中的1-萘酚，并能有效监控制剂中的主要有关物质。

（3）盐酸度洛西汀最大的降解产物是1-萘酚，1-萘酚是盐酸度洛西汀醚解后的产物，该降解受酸和湿热等条件催化。

[1]施友铃,沙吉达.HPLC法测定盐酸度洛西汀肠溶片的有关物质与含量 [J].中国药事,2007,21(9):720-722.

[2]Srinivasulu P.A validated stability indicating rapid LC method for duloxetine HCl [J].Pharmazie,2009,64(1):10-13.

[3]周桦，张晓炜.气相色谱法测定化妆品中的α-萘酚[J].中国公共卫生,1998,14(2)：78.

[4]王娅,牟兰.光谱法研究1-萘酚、2-萘酚与瓜环的包结作用 [J].光谱学与光谱分析,2007,27(9):1 820-1 825.

[5]于成峰.高效液相色谱法测定染发剂中的α-萘酚 [J].化学世界,2000,41(2):101-103.

[6]孙伟,韩军英.萘酚的电化学性质及示差脉冲伏安法测定 [J].化学分析计量.2003,l2(4):10-12.

[7]Ozhan G.A simple method for the determination of carbaryl and 1-naphthol in fruit juices by high-performance liquid chromatography-diode-array detection[J].J Food Prot,2003,66(8):1 510-1 513.

Determ ination of 1-Naphthol in Duloxetine Hydrochloride by HPLC

Ding Yunhui Guo Shengrong

To establish an HPLC method for determination of 1-naphthol in duloxetine hydrochloride.HPLC method was performed with Agilent C18 column(5 μm,4.6mm×250mm),230 nm detection wavelength，and the mobile phase consisting of phosphate buffered solution（pH=5.8）-acetonitrile（63∶37）.The column temperature was 30℃.The flow rate was 1.0 mL/min.Duloxetine hydrochloride was separated with its impurities thoroughly;the LOD was 0.132 ng for 1-naphthol test．The method was simple，rapid，specific and accurate.It can be used to determine 1-naphthol in duloxetine hydrochloride and its related substances.

Duloxetine hydrochloride;1-naphthol;Related substances;HPLC

TQ 243.1+3

丁云晖 女 1977年生 上海交通大学工程硕士 从事药物科研开发工作

2010年3月