新辅助化疗对乳腺癌ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67表达的影响

郭阿垚，于鹏飞，姚凡，金锋

（中国医科大学 附属第一医院乳腺外科，沈阳 110001）

新辅助化疗对乳腺癌ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67表达的影响

郭阿垚，于鹏飞，姚凡，金锋

（中国医科大学 附属第一医院乳腺外科，沈阳 110001）

目的 探讨新辅助化疗对乳腺癌生物学标志物ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67表达的影响。方法 选取64例接受新辅助化疗的乳腺癌患者，用免疫组化SP法检测新辅助化疗前后ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67的表达。用荧光原位杂交（FISH）检测C-erbB2表达为阳性者的Her-2基因扩增水平。结果 新辅助化疗后ER、C-erbB2和p53表达发生改变的分别为13例、7例和9例，这种表达的改变无统计学意义（P>0.05）。新辅助化疗后PR和Ki67表达发生改变的分别为15例、18例，前后表达改变有统计学意义（P<0.05）。结论 新辅助化疗对ER、C-erbB2、p53的表达没有影响，可以提高乳腺癌PR表达的阳性率，降低Ki67的表达水平。若C-erbB2表达阳性，需用FISH进一步检测。

新辅助化疗；乳腺癌；ER；PR；C-erbB2；p53；Ki67

新辅助化疗（neoadjuvant chemotherapy，NAC）是乳腺癌多学科综合治疗的重要组成部分，已成为局部晚期乳腺癌治疗的新趋势，同时逐渐应用于早期乳腺癌［1］。因此，NAC对乳腺癌雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone receptor，PR）、C-erbB2、p53和 Ki67这些生物学标志物表达的影响就尤为重要，但是目前并没有明确的结论。本文通过对本组病例进行分析，探讨NAC对这些标志物表达的影响。

1 资料与方法

1.1 资料

选择中国医科大学附属第一医院乳腺外科2006年1月至2009年8月的初治乳腺癌患者64例，均为女性，年龄25～70岁，中位年龄48岁。绝经前41例，绝经后23例；依据国际抗癌联盟（UICC）标准术前临床分期，Ⅱ期28例，Ⅲ期36例；浸润性导管癌63例，浸润性小叶癌1例。NAC后行乳腺癌改良根治术55例，行保乳根治术9例。

1.2 病例入选标准

（1）女性，可手术乳腺癌患者。（2）NAC前未接受任何相关治疗。（3）NAC前无远处转移病灶。（4）NAC前行乳腺肿物18G空心针穿刺活检，病理确诊为乳腺癌。（5）心肺肝肾功能正常，且无其它化疗禁忌症。（6）NAC后病理完全缓解，不能做标志物检测者排除在外。

1.3 新辅助化疗方案

采用CEF方案、T方案和TP方案。其中CEF方案32例，T方案11例，TP方案21例。CEF方案：环磷酰胺600mg/m2、表柔比星60～80mg/m2、替加氟650mg/m2或 5-氟尿嘧啶 500mg/m2；T方案：多西他赛75mg/m2；TP方案：多西他赛75mg/m2、顺铂40 mg/m2。21d为一个化疗周期。完成2个周期者26例，3个周期者7例，4个周期者30例，6个周期者1例。

1.4 检测方法及结果判定

1.4.1 免疫组化SP法检测ER、PR、p53和Ki67均为核染色，阳性细胞核≥10%为（+），<10%为（-）；C-erbB2定位于细胞膜，没有染色或少于30%肿瘤细胞染色为阴性（-），>30%的肿瘤细胞有不完整细胞膜染色为弱阳性（+），>30%的肿瘤细胞有较弱但完整的细胞膜染色为阳性（++），>30%的肿瘤细胞有较强完整的细胞膜染色为强阳性（+++）。本研究把免疫组化法结果为（-）和（+）者看作C-erbB2表达阴性，即HER-2基因无扩增，（++）及（+++）者看作 C-erbB2表达阳性，即HER-2基因扩增，需进一步行FISH检测。

1.4.2 FISH检测：检测HER-2基因的扩增水平。统计Ratio值（Ratio值=30个细胞核中红信号总数/绿信号总数）。Ratio<1.8为阴性，提示HER-2基因无扩增；Ratio>2.2为阳性，提示HER-2基因扩增；Ratio在1.8～2.2时，选择增加计数细胞至100个，或重做FISH检测来判断最终结果。

1.5 统计学方法

应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。采用四格表资料的χ2检验，以P<0.05为有统计学意义。

2 结果

Biomarker Pre-NAC Post-NACPPR

（+） 26 37 0.044（-） 34 23

Ki67

（+） 33 15 0.001（-） 27 45

2.1 新辅助化疗后病例情况

NAC后，有4例（6.25%）达到病理完全缓解，需排除在实验之外，其余60例进入实验组。

2.2 新辅助化疗前后ER的表达及变化

NAC前后ER表达阳性的分别有17例（28.3%）、22例（36.7%），阴性的分别有 43例（71.7%）、38例（63.3%）。共有13例（21.7%）ER表达改变，其中有4例（6.7%）阳性变为阴性，有9例（15%）阴性变为阳性。统计分析结果示NAC前后ER表达无显著性差异（P=0.436）。

2.3 新辅助化疗前后PR的表达及变化

NAC前后PR表达阳性的分别有26例（43.3%）、37例（61.7%），阴性的分别有 34例（56.7%）、23例（38.3%）。共有15例（25%）PR表达状态改变，其中有2例（3.3%）阳性变为阴性，有13例（21.7%）阴性变为阳性。统计分析结果示，NAC前后PR表达改变有统计学意义，NAC后PR阳性率升高（P=0.044）。见表1。

2.4 新辅助化疗前后C-erbB2的表达及变化

NAC前后C-erbB2表达阳性的分别有18例（30%）、21例（35%），阴性的分别有42例（70%）、39例（65%）。表达阳性的都已行进一步的FISH检测，其中NAC前免疫组化检测C-erbB2表达阳性的有37例，FISH确认后有18例。NAC后免疫组化检测C-erbB2表达阳性的有39例，FISH确认后有21例。免疫组化检测的准确率为51.3%。统计分析结果示NAC前后C-erbB2表达无统计学差异（P=0.697）。

2.5 新辅助化疗前后p53的表达及变化

NAC前后p53表达阳性的分别有18例（30%）、11例（18.3%），阴性的分别有42例（70%）、49例（81.7%）。共有9例（15%）p53表达状态改变，其中有8例（13.3%）阳性变为阴性，有1例（1.7%）阴性变为阳性。统计分析结果示NAC前后p53表达无统计学差异（P=0.2）。

2.6 新辅助化疗前后Ki67的表达及变化

NAC前后Ki67表达阳性的分别有33例（55%）、15例（25%），阴性的分别有27例（45%）、45例（75%）。共有18例（30%）Ki67表达状态改变，其中有15例（25%）阳性变为阴性，有3例（5%）阴性变为阳性。统计分析结果示NAC前后Ki67表达改变有统计学意义，NAC后Ki67表达下降（P=0.001）。见表 1。

3 讨论

乳腺癌NAC具有降低乳腺癌分期、减少手术范围、评价肿瘤对药物敏感性等特点［2］。而乳腺癌ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67的表达对于内分泌治疗、化疗、生物治疗等的选择及疗效的预测有重要意义。因此，有必要了解NAC对乳腺癌ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67表达的影响。

乳腺癌是激素依赖性肿瘤，它的生长受雌激素和孕激素调控，多数乳腺癌组织均有其受体表达，阳性说明肿瘤分化程度高，恶性程度低，淋巴结转移慢，对内分泌治疗敏感性高，预后好。

本研究显示，NAC后ER的表达改变没有统计学意义，而PR阳性率升高，改变有统计学意义。虽然NAC后ER和PR表达的改变情况仍存在争议，但个体病例的改变是存在的。本研究中ER和PR各有21.7%、25%的表达有所改变。这可能是由于所有肿瘤细胞都来自分化的乳腺细胞，均表达激素受体，所以激素受体状态的改变可能是治疗过程中药物诱导了增殖的肿瘤细胞重新表达激素受体［3］。

在以前发表的研究中，NAC后ER、PR的表达改变率范围分别为2%～17%和18%～58%［4］。与我们得出的结论相比，PR是符合的，ER高于该范围。有研究显示ER的改变为5%，其研究中病例的中位年龄为58岁，高于本研究10岁，患者的雌激素水平与绝经情况可能与我们较高的ER改变率有关。

Kasami等［5］的研究结果NAC后PR的改变有统计学意义，与本研究一致。但其PR的改变趋势是阳性率下降，而本研究是阳性率升高。对于这种差异，我们认为本研究的结论是有根据的。对于激素受体状态的改变，除了药物诱导，治疗期间肿瘤细胞的选择性克隆也是一个原因，即激素受体阳性或者阴性的细胞选择性存活。一般来说，激素受体阴性的细胞可能对化疗更加敏感，所以化疗期间，阳性的细胞得以存活，造成了化疗后的阳性率升高。同时，与本研究相比，Kasami等研究中的病例伴有局部浸润或远处转移，这也可能是造成PR阳性率改变不同的原因。

NAC后ER仍然可以预测内分泌治疗的反应，同时ER状态的改变也没有统计学意义，所以NAC并不会引起后续的化疗抵抗和激素治疗抵抗［5］。而对于NAC前后激素受体状态改变的患者，无论前后，只要激素受体有阳性，术后就应辅以内分泌治疗，这可以提高患者的无病生存率和总生存率［6］。

Her-2是一种原癌基因，对细胞的分化、增殖发挥重要的调节作用，在20%～30%的乳腺癌中明显扩增。其蛋白产物C-erbB2的过量表达常预示着肿瘤的恶性程度高，对内分泌治疗反应差，易复发和短存活期。Her-2可作为判断乳腺癌预后的一个独立指标，其过度表达可预测乳腺癌对以Her-2为治疗靶向的敏感性。现在，有两个常用的方法来确定它的状态，就是免疫组化和FISH。当免疫组化显示C-erbB2表达阳性时，会存在假阳性的可能，所以应进一步行FISH检测确认。本研究显示免疫组化检测C-erbB2表达阳性时的准确率为51.3%，如果仅仅应用免疫组化，一些病例的结果可能将出现改变，会影响进一步治疗的选择和对预后的评价。所以在临床应用中，当C-erbB2表达阳性时，应用FISH是很必要的。本研究结果显示，NAC后C-erbB2的表达状态是没有改变的，这与Kasami等［5］的研究结果是一致的。一些研究对此进行了解释，在肿瘤的起源中，Her-2过表达和基因扩增的改变比较晚，所以在肿瘤的转移和化疗过程中Her-2仍然保持不变［7］。

p53是一种抑癌基因，其p53阳性的肿瘤更具侵袭性，对蒽环类化疗药物的敏感性减低，同时影响无病生存率和总生存率，提示预后不良［8］，被认为是判断乳腺癌预后的重要指标。本研究结果表明，NAC前后P53的表达状态的改变没有统计学意义，但是阳性率有所降低。这与Arens等［9］的研究结果是一致的。

Ki67是一种与细胞有丝分裂密切相关，能反映细胞增殖状态的核抗原，与肿瘤的发生、浸润、种植与转移过程相关。Ki67的表达率越高，反映肿瘤增殖越活跃，同时肿瘤对蒽环类联合泰素的NAC反应越好［10］。如果NAC前Ki67≥20%，同时激素受体阴性，这是预测NAC后达到cCR的有力指标［11］。本研究结果显示，NAC后Ki67的表达下降，阳性率降低，有统计学意义。这与Faneyte等［7］的报道是一致的。NAC后Ki67的表达下降与瘤体缩小及周期中癌细胞的数量减少有关，下降的越明显，预示着NAC的疗效越好，尤其对于没有达到PCR的患者，NAC后Ki67的水平是预测无病生存率和总生存率的有力指标［12］。

当然，影响NAC前后这些生物学标志物改变的因素有很多，比如样本的选择，穿刺病理的取材，肿瘤组织不同部位的生物学差异，免疫组化的技术，实验者的主观因素，化疗方案的应用等等。虽然在本研究中，已经采取随机选择病例，同一病理师进行评定，应用标准的化疗方案等措施，并在实验中仔细操作，但由于样本的地域差异，样本量相对较小，肿瘤的异源性，客观条件局限等因素，本研究的结论可能还存在一定的片面性，有待进一步的研究。

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（编辑 孙宪民，英文编辑 赵传胜）

The Effect of Neoadjuvant Chemotherapy on Expressions of ER，PR，C-erbB2，p53and Ki67in Breast Cancer

GUOA-yao1，YUPeng-fei1，YAOFan1，JINFeng1
（1.Department of Breast Surgery，The First Hospital，China Medical University，Shenyang 110001，China）

ObjectiveTo study the effect of neoadjuvant chemotherapy（NAC）on expressions of ER、PR、C-erbB2、p53and Ki67in breast cancer.MethodsSixty-four patients

neoadjuvant chemotherapy.Expressions of ER、PR、C-erbB2、p53and Ki67in breast cancer were measured by immunohistochemistry（IHC）.When the expression of C-erbB2was positive，FISHwas recommended to verify the level of Her-2gene amplification.ResultsThe expressions of ER，C-erbB2，p53had changed in 13，7，9cases after NAC，and there was no statistical significance （P>0.05）.The expressions of PR，Ki67had changed in 15，18cases after NAC，and there was statistical significance（P<0.05）.ConclusionNACcan improve the expression of PRand reduce the expression of Ki67.There is no effect in ER，C-erbB2and p53.When IHCindicates the expression of C-erbB2was positive，FISHis recommended.

neoadjuvant chemotherapy；breast cancer；ER；PR；C-erbB2；p53；Ki67

R737.9

A

0258-4646（2010）12-1051-04

郭阿垚（1983-），男，硕士研究生.

金锋，E-mail：jinfeng66cn@hotmail.com

2010-06-21