付 宇,高 建,赵 宇,孙艳芳,刘秀梅,丁笑丽
(黑龙江省疾病控制中心,黑龙江 哈尔滨150030)
乌头碱是一种二萜生物碱。存在于川乌、草乌、附子等植物中的主要有毒成份。民间常用草乌、川乌等植物来泡制药酒。乌头碱为二元酯类化合物,分子式为C34H47NO11,水溶液对石蕊呈碱性反应。溶于无水乙醇、乙醚和水,微溶于石油醚。易水解失去一分子乙酸,毒性即降低,进一步水解除去一分子苯甲酸生成乌头胺,,临床上用于缓解癌痛,尤其适用于消化系统癌痛;外用时能麻痹周围神经末梢,产生局部麻醉和镇痛作用;有消炎作用,还有发汗作用。乌头碱对各种神经痛和痛风有镇痛作用。近些年来,以乌头碱为主要功效成分的保健食品日益增多,但是样品基质成分相对复杂,本文参考相关文献报道在大量实验的基础上,对不同种类的保健食品处理方法进行摸索,调节酸碱度,经浓氨试液-甲醇(2∶20)混合溶液处理,以乙醚振摇萃取,干扰少,峰形好,减少了对色谱柱的污染。适用于各类保健食品的测定。
高效液相色谱仪(紫外检测器);恒温水浴锅。
甲醇(色谱纯);石油醚(30~60℃)、氨水、冰乙酸,均为分析纯。
乌头碱标准溶液:精密称取乌头碱标准品10mg置于10 mL容量瓶中,加入甲醇使其溶解并定容至刻度,混匀,此溶液浓度为1.0mg·mL-1。临用时用甲醇稀释为50μg·mL-1的标准使用液。
乌头碱标准溶液系列:分别吸取标准使用液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0mL 于 10mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度,即得浓度为0.0、5.0、10.0、15.0、20.0,25.0、50.0μg·mL-1标准系列。
色谱柱:DiamonsilTMC18柱,150×4.6mm,5μm;
柱温:室温;
流动相:甲醇-0.1%三乙胺(70∶30)为流动相;
流速:1.2mL·min-1;
进样量:10μL;
检测波长:232nm。
称取试样2g,置于干燥烧杯中,精密加入浓氨试液-甲醇(2∶20)混合溶液50mL,冷浸1h后加热回流1h,放冷,摇匀,过滤,将滤液蒸干,加水l0mL使残渣溶解,置于分液漏斗中加乙醚振摇萃取3次,乙醚用量依次为10、10、5mL,收集乙醚液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5mL容量瓶中,摇匀,定容,用滤膜过滤备用。
用浓度为 0.0、5.0、10.0、15.0、20.0,25.0、50.0μg·mL-1的标准溶液进样分析,测得标准系列线性回归方程为y=-12419.30x+8469.37,相关系数r=0.9997,乌头碱在0~50μg·mL-1的线性范围内最低检出限为0.5μg·mL-1。
对同一样品连续测定10次,结果RSD为6.7%。以3种样品为本底,分别加入一定量的标准溶液,回收率为85.8%~92.7%。见表1。
表1 乌头碱回收率试验结果Tab.1 Experimental results of aconitine recovery
从1表中数据可知,此方法回收率好,准确度较高;在实际工作中具有较高的可行性。
乌头碱常见的测定方法是化学法和薄层扫描法[2]等,这些方法操作比较繁琐,且操作时间较长,容易受到干扰。高效液相色谱法分离速度快,检测灵敏度高,操作简便,应用范围广,分离效率高,峰形正常,线性范围较宽,选择性好,重现性好,特别适合复杂样品的分离测定,已经成为应用最为广泛和有效的分离分析手段。
样品用浓氨试液-甲醇混合溶液处理,可有效去除试样中其他物质,减少色谱干扰。测定结果见图1、2。
图1 标样谱图Fig.1 Spectrogram of standard samples
图2 样品谱图Fig.2 Spectrogram of samples
由图1、2可见,文中所述样品制备方法可有效的去除保健食品中复杂基质的干扰,纯化了样品溶液,减少了其对色谱柱及检测器的污染。
通过上述实验结果可以看出,此方法快速简便,准确率高,适合保健食品中的乌头碱的分析测定。
[1]中华人民共和国药典(一部制川乌)[M].化学工业出版社,2005.
[2]王浴铭.活血壮筋丹中乌头碱含量的双波长薄层扫描法测定[J].中成药研究.