高效液相色谱法测定养阴明目颗粒中马钱苷含量

马 玲，叶 磊

(1.安徽省药物研究所·安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽 合肥 230022；

2.安徽中医学院药学院，安徽 合肥 230031)

高效液相色谱法测定养阴明目颗粒中马钱苷含量

马 玲1，叶 磊2

(1.安徽省药物研究所·安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽 合肥 230022；

2.安徽中医学院药学院，安徽 合肥 230031)

目的建立测定养阴明目颗粒中马钱苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Promosil C18柱（250 mm×4.6 mm，5!m），流动相为乙腈－水（15∶85），流速1.0 mL/min，检测波长为240 nm。结果马钱苷进样量在0.084～0.84!g范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9），平均回收率为98.67%，RSD=0.67%（n=6）。结论高效液相色谱法简便可行、专属性强、重现性好，可较好地控制养阴明目颗粒的质量。

养阴明目颗粒；高效液相色谱法；马钱苷

养阴明目颗粒是由山茱萸、枸杞子、沙苑子、三七、五味子、大蓟炭等16味中药组成的复方制剂，具有滋补肝肾、止血化瘀、清热明目的功效，用于治疗脾肾两虚、肝郁火旺等所致黄斑变性及其他眼底退行性病变。为有效控制该制剂质量，笔者选择方中君药山茱萸的有效成分马钱苷作为含量控制的指标成分，采用高效液相色谱法测定，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－10AVP型高效液相色谱仪（日本岛津），包括单元泵、紫外检测器、浙大N2000色谱工作站；AS3120B型超声提取器。马钱苷对照品（含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号为111640－200503）；养阴明目颗粒及缺山茱萸的阴性样品（自制）；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Promosil C18柱（250 mm×4.6 mm,5!m）；流动相：乙腈 －水（15 ∶85）；检测波长 240 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10!L。理论板数按马钱苷计算应不低于3 000。

2.2 溶液制备

精密称取常温减压干燥12 h的马钱苷对照品适量，加80%甲醇制成每1 mL含42!g的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取样品颗粒约1 g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min,放冷，再称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL,加在中性氧化铝柱（200～300目，5 g，内径1 cm）上,用40%甲醇40 mL洗脱，收集流出液和洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，摇匀，0.45!m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取缺山茱萸的阴性样品适量，按供试品溶液制备方法操作，制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液适量，按上述色谱条件进样，记录色谱图（图1）。结果表明马钱苷色谱峰分离良好，且本品中其他药材对马钱苷的测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取对照品溶液（0.084 g/L）1，2，4，6，8，10 mL，置10 mL量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件注入液相色谱仪，记录马钱苷峰面积，以对照品进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=11 948 X－11.837,r=0.999 9（n=6）。结果表明，马钱苷进样量在0.084～0.84!g范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10!L共6次，分别注入液相色谱仪，测定峰面积。结果的 RSD=1.17%（n=6），表明仪器精密度较好。

重现性试验：取同一批样品6份，按供试品溶液制备方法操作，各进样10!L，按上述色谱条件注入液相色谱仪，依法测定。结果马钱苷平均含量为0.908 mg/g，RSD=1.96%(n=6），表明方法重现性较好。

稳定性试验：将同一供试品溶液放置0,1,2,4,6,8 h后分别测定。结果的 RSD=1.47%（n=6），表明供试品溶液在8 h内较稳定。

加样回收试验：取已知含量（0.908 mg/g）的样品各6份，每份约0.45 g,精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入马钱苷对照品溶液（42!g/mL）5，10，15 mL各2份，按供试品溶液制备方法操作并测定，结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品，照供试品溶液制备方法制成溶液，分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各10 μL，按色谱条件注入液相色谱仪，用外标法以峰面积计算含量。结果批号为080904，080907，080910的样品中马钱苷含量分别为0.924，0.866，0.903 mg/g。

表1 马钱苷加样回收试验结果(n=6）

3 讨论

本品为含16味药的复方制剂,且马钱苷极性较强，参照《中国药典》[1]选用80%甲醇进行超声处理，进样后杂质峰干扰太大，故参照相关文献[2－3]，将80%甲醇处理后的样品过中性氧化铝柱，40%甲醇洗脱，最后以50%甲醇溶解，效果较理想。本试验再次表明，高效液相色谱法方法可靠，灵敏、快速，专属性强，重现性好，可作为养阴明目颗粒的定量分析方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：20.

[2]谭秋红.RP－HPLC法测定六味地黄丸中马钱苷的含量[J].中国医学工程，2007，15（7）：601 － 602.

[3]王玉峰，刘敏彦，李向军，等.高效液相色谱法测定耳聋左慈丸中马钱苷含量[J]. 中国药业，2009，18（10）：42 － 43.

Determination of Loganin in Yangying Mingmu Granules by HPLC

Ma Ling1,Ye Lei2
(1.Anhui Provincial Institute of Pharmaceutical Research,Anhui Provincial Research& Development Key Laboratory of Chinese Materia Medica,Hefei,Anhui,China 230022; 2.College of Pharmacy,Anhui College of Traditional Chinese Medicine,Hefei,Anhui,China 230031)

ObjectiveTo establish the external standard HPLC method for the determination of loganin in Yangying Mingmu Granules.Methods The Promosil C18column(250 mm×4.6 mm,5!m)was used.The mobile phase consisted of acetonitrile－water(15∶85).The flow rate was 1.0 mL/min.The UV detection wavelength was at 240 nm.Results The linear range for loganin was 0.084－0.84!g,r=0.999 9.The average recovery rate was 98.67%,RSD was 0.67%(n=6).Conclusion The method is proved to be simple with strong specificity and good reproducibility,which can be used to control the quality of the preparation.

Yangying Mingmu Granules;HPLC;loganin

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2010)05－0032－02

马玲,女,副研究员,主要从事中药研究与开发工作，（电话）0551 － 3669425（电子信箱）lingma518@soh9.com。

2009－03－03；

2009－06－20)