大叶紫珠不同采收期总黄酮含量的研究

刘笑蓉 ，周日宝 *，唐丽君 ，童巧珍 ，刘湘丹 ，刘佳胜 ，罗跃龙

（1.湖南中医药大学2008级研究生班，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208；3.湖南中医药大学2009级研究生班，湖南 长沙 410208）

大叶紫珠不同采收期总黄酮含量的研究

刘笑蓉1，周日宝2*，唐丽君1，童巧珍2，刘湘丹2，刘佳胜3，罗跃龙2

（1.湖南中医药大学2008级研究生班，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208；3.湖南中医药大学2009级研究生班，湖南 长沙 410208）

目的 为确定大叶紫珠最佳的采收期和采收部位提供科学依据。方法 将湖南会同县大叶紫珠种植基地不同时期采收的根、茎、叶，采用95%乙醇超声提取3次，每次1 h，采用紫外分光光度法测定总黄酮含量。结果 大叶紫珠总黄酮含量的积累随着植株的生长，总黄酮含量也随之变化，根、茎中总黄酮含量逐步增加，叶中总黄酮含量逐渐减少；不同药用部位总黄酮含量有显著差别，依次为：叶＞茎＞根。结论该项研究根据有效成分含量动态变化的规律为确定大叶紫珠最佳采收期和采收部位提供了一定的实验依据。

大叶紫珠；总黄酮；采收期；药用部位；紫外分光光度法

2010年版《中国药典》收录了中成药抗宫炎片，该药具有散瘀止血、消肿镇痛、清热解毒的功效，是妇科保健和治疗的常用中成药[1]。药材紫珠为该中成药的主要原料药材，来源于马鞭草科紫珠属药用植物广东紫珠Callicarpa kwangtungensis Chun。长期以来，中成药抗宫炎片一直收购野生广东紫珠为药材原料，导致野生广东紫珠资源濒临枯竭，人工种植刚刚起步，广东紫珠药材已远远不能满足抗宫炎片生产的需求。现在市场上大量使用大叶紫珠Callicarpa macrophylla Vahl.替代广东紫珠。湖南省会同县已开展了大叶紫珠的人工种植。紫珠中的主要有效成分为黄酮类化合物[2-4]，我们开展了人工栽培大叶紫珠总黄酮含量动态变化的研究，以便为人工栽培大叶紫珠最佳的采收期和采收部位提供科学依据。

1 实验材料

1.1 材料

药材采自湖南省会同县紫珠种植研究试验基地，经湖南中医药大学周日宝教授鉴定植物系马鞭草科紫珠属大叶紫珠Callicarpa macrophylla Vahl.。从2009年10月12日起至2009年12月21日止每隔10 d采集植株，晒干，分别取植株的根、茎、叶作药材供试品。

1.2 试剂

95%乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠（均为分析纯）；芦丁对照品（批号1001080-200707，湖南省药检所提供）。1.3 仪器

752 pc型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司制造）；KQ-500DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FA2004电子天平（上海恒平科学仪器有限公司）；旋转蒸发器RE-52A(巩义市予华仪器有限公司）；FW135型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

精密称取过60目筛的药材粉末约3 g，加95%乙醇50 mL，80℃超声波提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至滤液低于100 mL为止，置100 mL量瓶中，加95%乙醇定容，量取10 mL至50 mL量瓶中,定容,即得。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取于120℃ 干燥至恒质量的芦丁对照品30.0 mg，置于100 mL量瓶中，加入95%乙醇 20 mL，置温水中加热使溶解，放冷，用95%乙醇定容。

2.3 吸收波长的确定

取对照品溶液和供试品溶液各5 mL，分别置25 mL量瓶中，定容，摇匀后分别于400～700 nm波长范围扫描，2种溶液在495 nm处均无吸收峰。另取对照品和供试品溶液各5 mL，分别置25 mL量瓶中，加5%亚硝酸钠1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4%氢氧化钠4 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min后分别于400～700 nm波长范围扫描，在495 nm处均有最大吸收波长，紫外光谱形状相同。见图1。

2.4 线性关系考察

精密量取对照品溶液 1、2、3、4、5、6 mL，分别置 25 mL量瓶中，各加95%乙醇至25 mL，按“2.3”项下方法显色，照分光光度法 (《中华人民共和国药典》2005年版一部附录VB)[5]，测定吸光度，绘制浓度一吸光度标准曲线，求得回归直线方程：

结果表明芦丁对照品溶液浓度在0.012～0.073 mg/mL。范围内溶液浓度与吸光度线性关系良好。

2.5 回收率实验

精密称取已知含量的大叶紫珠0.39 g，加入芦丁对照品，按供试品溶液的制备方法平行制备6份,按上述方法处理测定。试验结果芦丁的平均回收率100.41%，RSD为1.46%，n=6。表明本含量测定方法准确可靠，结果见表1。

表1 回收率实验结果

2.6 样品含量测定

精密量取供试品溶液5 mL，置25 mL量瓶中，按“2.3”项下方法测定，用回归直线方程计算总黄酮含量，结果见表2。

表2 大叶紫珠不同采收期各部位超声提取总黄酮含量测定结果

3 结论

预实验中首先考察了冷凝回流提取与超声提取，结果发现，超声提取的总黄酮含量要远高于冷凝回流提取的总黄酮含量。此外，考察了3个因素分别为：A乙醇浓度（%）、B 超声时间（min）、C 提取次数，每个因子选取 3 水平，选用L9（34）正交表进行试验，以总黄酮的含量为考察指标。正交试验结果显示：总黄酮提取的最优条件为：95%乙醇、提取3次、每次1 h。实验方法学考察中，仪器的精密度实验，样品的稳定性实验和重复性实验的RSD均小于2%，表明方法的精密度好。

同一采收期，大叶紫珠各部位总黄酮含量高低依次为：叶＞茎＞根。植株总黄酮含量地上部分高于地下部分，随着植株生长期的延长，植株叶中的总黄酮含量逐渐减少，茎、根中总黄酮含量逐步增加，说明总黄酮为叶片中的次生代谢产物，逐渐从植物地上部分转移到地下部分。

大叶紫珠叶中有效成分总黄酮含量最高，由于紫珠是全株皆可入药，所以在植株未落叶而即将落叶时采收药材其药用价值是最高的。

[1]马延升,朱兰翠.抗宫炎片临床进展[J].中国现代医学杂志,2004,14(10):69-71.

[2]王祝年,韩 壮.裸花紫珠的化学成分[J].热带亚热带植物学报,2007，15(4)：359-362.

[3]周伯庭，李新中，徐平声，等.广东紫珠地上部位化学成分研究(Ⅱ)[J].湖南中医学院学报，2005，25(1)：20-22.

[4]梁纪军，徐 凯.裸花紫珠总黄酮的抗炎、止血作用研究[J].现代中西医结合杂志,2009，18（26）：3 161-3 162.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京.化学工业出版社,2005：附录 VB.

Research of total flovone content in Callicarpa macrophylla Vahl.in different harvest time

LIU Xiao-rong,ZHOU Ri-bao,TANG Li-jun,TONG Qiao-zhen,LIU Xiang-dan,LIU Jia-sheng,LUO Yue-long
(TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)

ObjectiveTo study the best harvest times and medicinal part of Callicarpa macrophylla Vahl.Method The 95%ethanol was used for ultrasound extract three times,once an hour，and the total flavonoids content were tested by UV spectropnotometer.Result Total flavonolds accumulation of Callicarpa macrophylla Vahl.changed along with the growth of the plants,i.e.the contents increased gradually in the trunk and root decreased in leafs;and the contents of total flavonoids in different parts of the plant were significantly different,and the order was leaf＞root＞trunk.ConclusionThis research can provide a foundation to determine the best harvest times and medicinal part of Callicarpa macrophylla Vahl.

Callicarpa macrophylla Vahl.;total flavonoids;harvest times;medicinal part;UV spectropnotometer

* 周日宝，男，教授，硕士研究生导师，E-mail：zhouribao20032003@yahoo.com.cn。

R284.1

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2010.11.011.034.03

2010-06-07

湖南省中医药管理局资助项目（2009010）；湖南省教育厅高校创新平台开放基金资助项目（09k061）。

刘笑蓉(1986-),女,湖南常德人,在读硕士研究生，从事中药资源与质量研究。

（本文编辑 徐爱良）