长春花组织培养与快繁技术初探

吴全德 游建刚

（黑龙江省柴河林业局，黑龙江 海林 157131）

长春花[Catharanthus roseus(L.)G.Don]为夹竹桃科多年生草本或亚灌木花卉，既可用于城市园林地被，也可用于室内盆栽观赏[1]；该花卉又有很好的药用价值，从中提取分离出长春碱、长春新碱、蛇根碱等100多种吲哚生物碱[2]，其中长春碱和长春新碱是目前应用最广泛的天然抗肿瘤药物[3]。对长春花进行组织培养与快繁技术研究，可以在短时间内获得优良品种的种苗，也可能提高其植株中生物碱的含量，为工业生产吲哚生物碱类药用成分提供技术支撑。

1 试验材料与方法

1.1 长春花植株无菌材料的获得

采用生长健壮无病虫害的长春花植株获得的种子作为外植体。将晒好的长春花种子用蒸馏水浸种4h，用75%酒精消毒30s，放入浓度为1.1%有效氯的次氯酸钠中消毒30min，然后无菌水冲洗3～5次，每次3min～5min，无菌滤纸吸干表面水分，再接种于1/2MS 培养基中，每瓶接种子20 粒，3个重复，10d 以后长出无菌苗。

1.2 培养条件与方法

诱芽培养基为MS+0.50mg/L 6-BA+0.06mg/L IBA。从种子长出的带有2 片真叶的无菌苗，用剪刀剪出心芽 (带2 片真叶)，接入诱芽培养基中，25d 后观察诱芽情况。

试管苗增殖到一定数量后，选择高度基本一致的单株不定芽接入生根培养基1/2MS+0.10mg/L IBA+0.20mg/L NAA 中，诱导生根，16d 后观察发根情况。

以上培养基均加入7g/L 琼脂和3%蔗糖，pH值5.6～5.8，接种完毕后将培养瓶置于25℃左右恒温培养箱内，光照条件为12h/d，湿度40%～70%进行培养。

2 试验结果与分析

2.1 无菌苗的生长与增殖

用种子繁殖无菌苗，种子的消毒至关重要，不同的消毒剂及消毒时间都会影响消毒效果。次氯酸钠是长春花种子较好的消毒剂，用1.1%有效氯的次氯酸钠消毒种子30min，种子发芽率达96.7%，而且没有感染植株。

将带有2 片真叶的无菌苗，用剪刀剪出心芽，接入诱芽培养基中，25d 后出芽，总出芽数135个，增殖系数达到4.83，而且苗壮，生长旺盛，叶色浓绿，芽增殖多。可见，MS+0.50mg/L 6-BA+0.06mg/L IBA+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂是长春花芽增殖培养的最适培养基。

2.2 生根培养

芽增殖到一定数量后，将不定芽接入以1/2MS 为基本培养基，添加30g/L 蔗糖和7g/L 琼脂的培养基中诱根，设置0.10mg/L IBA、0.20mg/L NAA 的生长素配比。接种7d 后开始发根，根系白色，长势旺，无愈伤组织产生，也无新芽诱导，生根率高达90%以上，平均根数较多。说明该生根培养基诱导生根效果最好。

2.3 炼苗及移栽

当长春花的幼根在生根培养基上长到1～3cm时，去掉封口膜，移出培养室，于自然光温室中炼苗3d 后，洗净培养基，移栽到用2%甲醛水溶液消毒过的含水量为60%的基质（腐殖土∶珍珠岩为 2∶1）中，覆盖塑料薄膜保湿 5～7d，保持温度25℃左右，湿度80%～90%，在移栽后7～9d 就开始发新叶。30d 后观察统计，移栽成活率达92%。移栽至装有营养土的营养钵中继续炼苗25d 后，可植入大田。

3 结论

在植物组培快繁中，增殖系数和成苗率一直是人们关心的问题，只有增殖速度快，在生产实践中才有应用价值。只有选择适当的细胞分裂素和生长素的浓度组合，才能取得较好的培养效果[4]。在长春花的组织培养与快繁技术研究中，植物生长素6-BA 和IBA 对长春花芽诱导效果较明显，MS+0.50mg/L 6-BA+0.06mg/L IBA+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂培养基芽增殖效果最好。在生根培养的过程中，IBA 和 NAA 诱导的生根率高，且长势好。因此，1/2MS+0.10mg/L IBA+0.20mg/L NAA+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂为最佳生根培养基。培养所获得的试管苗经炼苗后，移栽成活率较高。

通过组织培养，从由种子长出的无菌苗取外植体到再生苗移栽到大田整个过程仅要50～60d，可快速、高效且低成本的解决长春花生产中所需的种苗问题。

[1]陈俊愉，程绪珂.中国花经[M].上海：上海文化出版社，1990，484.

[2]中国科学院北京植物研究所.中国高等植物图鉴：第3 册.北京：科学出版社，1974.

[3]季字彬.中药有效成分药理与应用.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1995.

[4]陈泉，李建国.长春花高效快繁技术研究.安徽农业科学，2009，37（22）：10404-10406.