组织染色中ＨＥ染色法的改良

李爱红

[摘要]目的：比较改良苏木素伊红(HE)染色法与传统染色法的染色效果。方法：分别用传统染色法和改良染色法对组织切片合细胞图片进行染色，进行比较。结果：改良染色法较传统染色法，染色液中沉淀更少，无氧化膜，染色时间短，不需过滤，使用期限长，染色效果好。结论：改良染色法克服了传统染色法的缺点，有利于切片质量的提高：

[关键词]组织染色；HE染色：改良

[中图分类号]R446[文献标识码]A[文章编号]1674-4721(2009)05(b)-054-02

在病理组织切片染色中，苏木素伊红(HE)染色是其最基本、最常用的一种染色方法，在病理组织制片中占有很重要的位置，HE染色的质量优劣直接影响病理诊断的准确性。HE染色中，染色液是决定染色效果和切片质量最为重要的因素之一。在长期的实际应用中发现，传统的HE染液配方有下列弊端，如染液配制步骤复杂、易形成氧化膜、配方中某种试剂用量不合理产生沉淀、染液有效期短等，这些弊端其严重影响切片质量及病理诊断的质量。笔者经过实践摸索，参照文献资料，在传统HE染液的原配制方法的基础上作了一些改良，经过比较，明显提高了染色质量，现报道如下：

1材料与方法

1.1经典染液(1000mI)配制

硫酸铝钾100g，蒸馏水950mI，加热溶解；苏木素5g，无水乙醇50ml；红色氧化汞1g。配制方法：用蒸馏水溶解硫酸铝钾成A液，再倒入已用无水乙醇溶解的苏木素B液中混合，加热煮沸1min，冷却，待溶液不沸腾时缓慢加入红色氧化汞1g，继续加热至溶液变紫红色，冷却后过滤。使用之前加入16mI冰醋酸。

1.2改良染液(1000 ml)的配制

苏木素2g，硫酸铝5g，碘酸钾0.2g，95％乙醇250ml。蒸馏水700 ml，丙三醇50 ml，柠檬酸0.3 g。配制方法：将苏木素溶入乙醇充分摇匀为A液；将硫酸铝溶于蒸馏水中，成为饱和B液；将A液与B液混合、摇匀，将氧化剂碘酸钾加入混合液中，充分摇匀，放置5min后，依次加入中和剂丙三醇和促染剂柠檬酸，充分混合后可使用。

1.3方法

取脱落细胞学涂片和病检组织的石蜡切片，分为两组，分别用上述两种染液对每组在同一时间、同一染色条件下进行染色，对比实验。

2结果

对比观察发现，改良染液具有明显优越性，见表1。

3讨论

苏木素伊红染色是组织胚胎学和病理学中最常用的染色方法，其中染细胞核的苏木素是HE染色过程中的关键，苏木素染色的好坏决定着细胞核的着色深浅和着色质量。也决定了切片的质量，进而可以影响对切片和细胞涂片的观察，影响诊断的正确性，因此意义重大。在临床病理诊断中使用最多的是经典Harris苏木素染液，一直沿用至今，但其在配制中存在以下问题：①苏木素用量大且易产生大量的氧化物漂浮于染液表面，沾污切片，而且不易洗干净，以致影响切片的染色质量，不利于镜检；②使用的氧化剂为氧化汞，汞为对生物有毒重金属，易造成环境污染，在生物体内蓄积，进而对人体健康造成伤害；③配制过程需要加热煮沸，操作不安全；④配制过程复杂，而且不易掌握氧化程度，配制的染色液染色效果常不理想。相对比，改良以后的苏木素染液，其优越之处在于：①苏木素用量少，用药量得到节约，每次仅用2g能配制成1000ml染液，分装成500甜两瓶，可染片6000余张。②染色效果优良，普遍适用于切片和细胞学各种涂片。③配制中不需要加热煮沸，安全性好。④用碘酸钾代替了有毒的氧化汞作为氧化剂，而且可以很容易的控制氧化程度。

苏木素能发挥染料作用的关键，是其变成真正的染料苏木红，而这一转变过程的关键是氧化过程，氧化过程的控制决定了苏木素染液的质量。由于氧化汞在水中和乙醇中的溶解性都非常差，所以其作为氧化剂，氧化过程不易控制。氧化不充分，其染色能力差；过度氧化则染液表面会出现一层氧化膜，该氧化膜非常容易引起切片污染。相比之下，氧化剂碘酸钾是水溶性氧化剂，在与苏木素氧化过程中呈均匀反应，持续性增强是其氧化还原作用的特点，加之没有氧化膜的形成，所以也减少了对切片的污染，且费用比使用氧化汞低廉，最重要的是碘酸钾无毒性，还能大大减少染色废液对环境的污染月。应用丙三醇作为中和剂，可防止氧化过度；用硫酸铝代替硫酸铝钾作为媒染剂，用枸橼酸作为促染剂都是保证染液氧化程度适中的有力措施，这样就能进一步有效地防止染液表面氧化膜及沉渣形成，不用过滤就可长期贮存，且减少对切片和涂片的污染。改良的苏木素染液克服了经典染液的缺点，有利于切片质量的提高。