精液处理方法在人工授精中的选择

李立梅　王静力　曹　阳

【摘 要】 精液处理是辅助生育技术中人工授精所必须的。目的：将非正常的精液处理后达到符合WHO要求的活动精子密度和活力；减少或去除精浆内前列腺素、免疫活性细胞、抗精子抗体、细胞与碎片；降低精子的粘稠度。除了精子本身受精功能障碍或卵子异常外，精液处理方法的选择和效果也是重要的原因之一。方法：本文采用两次洗涤、上游、非连续梯度离心三种基本方法，来处理不同的精液标本。结果：精液处理后的活率和妊娠率分别为：>60% 29.5%(20% 19.2%)、>95% 32.8%、>85% 30.5%。结论：不同的方法对不同精液标本的处理，可以从体外提取形态正常、无精浆和其它成分的优质活精子，增加精子的运动能力和穿卵能力，以及体外精子获能等。做人工授精使之有效地与卵结合，提高妊娠率[1]。

【关键词】 精液处理； 人工授精； 妊娠率

1 材料与方法

1.1 精液标本的收集

1.1.1 取精前一般禁欲5~7天，通过手淫的方式取精液，收集在无菌、无毒的取精杯内，如不成功，可通过性交将精液收集于无毒的避孕套内。

1.1.2 粘稠或有精子抗体的精液，可以收集在一个含有培养液的取精杯内；若精液量少于1ml，最好分次收集射精的精液标本。

1.1.3 逆射精：向病人仔细地解释整个过程，取得他的合作理解；在试验前一晚的9时，要他将4g NaHCO₃冲一杯水，溶解后服下；在取样前一小时，他必须再饮一杯含4g NaHCO₃的水，并且再多饮1~2杯水；在射精前排尿（即小便后立即射精）；射精后他将小便排入一含有5％血清HEPES-HTF液的容器内；逆射出的精子必须立即检查和处理。

1.2 精液处理

1.2.1 试剂 ①Hepes-HTF（In Vitro Care公司）;②SSS（Irvine Scientific公司）;③Isolate（Irvine Scientific公司）;④10％SSS Hepes-HTF液（1ml ②+9ml ①）。

1.2.2 精液处理方法[2]

1.2.2.1 两次洗涤法 一份精液加一份④稀释，300g离心10分钟，去上清，沉淀加1ml④悬浮，离心洗涤两次后，沉淀加0.5ml④悬浮做授精用。

1.2.2.2 上游法 方法一：上述洗精第二遍离心沉淀，弃去上清，轻轻指弹试管底让沉淀松散，小心沿着管壁加1ml④置37℃的CO₂培养内孵育30~60min，吸出沉淀上方呈云雾状的上游精子层培养液0.5ml悬浮做授精用。

方法二：将精液标本置试管底部，小心沿着管壁加入含有2ml④倾斜45度置37℃的CO₂培养内孵育90min，收集云雾状的上层培养液再次离心300g×10min，沉淀用0.5ml④悬浮做授精用。

1.2.2.3 Isolate非连续梯度离心法 取一支15ml尖底离心管，先加1~2ml Upper液，后加1~2ml Lower液于底部（每层梯度量必须是1∶1，若精液差，应适当减少每层梯度用量），再加精液离心300g×20min，去上清；连续悬浮离心两次，200g×10min，去上清，沉淀加0.5ml ④悬浮做授精用（③、④用前只需预热即可，不得放CO₂培养）。

2 结果

精液处理前应取少许精液做常规检查：测量精液量、精子浓度、活率及活力，并根据检查结果选择处理方式。从2006年1月~2007年12月共作113份标本分析，见表1。

3 讨论

在人工授精中，选择好精液处理方法是人工授精取得成功的关键因素。精子数目正常，活动力好，比较清洁的精液标本或向前运动精子总数（a+b）级低于200万的病人，虽然用非梯度离心法处理精液活率会增加，但Isolate对精液有一定的影响，所以两次洗涤法适合精子活力尚可、精液不液化的患者，但是多次的洗涤和离心会对精子微观结构造成破坏，同时长时间的操作会增加活性氧的含量[3]。精液粘稠度高或不液化不适宜上游法，因为精子必须克服重力来游动，虽然上游法处理的精液可达到100％，但一般上游法的回收率较低。Isolate非连续梯度离心法适合正常精液、精液极度粘稠、精子密度低下及精子活动力低的精液标本[4]，离心效果和临床妊娠率较高[5]，但是，由于不可能将离心液的成分清除彻底，有可能对受孕造成影响。

在以上方法使用中，尽量本着去繁就简的原则，如果一种方法解决不了时，可使用两种或两种以上的方法综合应用来提高优化效果。

参考文献

1 Carrel DT，Ewing L，Moder C，el a1．An evaluation of Various treatments to increase sperm penetration capacity for potential use in an in vitro fertifization program[J]．Fertil Steril，1992，57：134-136．

2 庄广伦，周灿权，梁晓燕．现代辅助生育技术[M].北京：人民卫生出版社，2005，6．

3 商学军，熊承良，夏文家，等．活性氧与弱精子症[J]．国外医学•计划生育分册，2001，(5)20：18-20．

4 BeerninkEJ，SouthwickGJ，YatesCD，et al．Sex preselection through albumn separation of sperm [J]．Fertil Steril，1993，59(2)：382-386.

5 Xu L，Lu RK，Zheng YL，et al．Comparative study on efficacy ofthree sperm —separation techniques[J]．Asia J Androl，2000，2(2)：131-134．

［收稿日期：2009-03-02］