盐提法提取波纹巴非蛤全脏器中糖蛋白的工艺条件研究

周国杰 黄晓玲 范秀萍

摘要对波纹巴非蛤全脏器中的糖蛋白的分离提取条件进行研究,结果表明:以0.5moL/L的NaCl溶液为浸提液,料液比为1∶12,75℃水浴浸提90min,提取液经透析浓缩,再以60%乙醇终浓度沉淀,得到糖蛋白粗品,其得率为1.64%,总糖与可溶性蛋白含量分别为38.3%和17.1%。

关键词波纹巴非蛤;糖蛋白;分离提取;工艺条件

中图分类号TS254.1;TQ936.22+3文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)21-0260-02

糖蛋白(glycoprotein)是一类由糖类与多肽或蛋白质以共价键连接而形成的结合蛋白,是生物体内重要的一类大分子,种类繁多,分布广泛,具有多种重要功能。目前已有报道证实从海洋软体动物海兔、虾夷扇贝、管角螺中提取的糖蛋白有明显的抗肿瘤、增强免疫活性。自由基是人体生命活动中生物化学反应的中间产物,许多疾病的发生、发展与自由基对组织的损伤有密切关系,自由基可加快机体的衰老过程,可诱发癌症、心血管疾病等。该研究采用盐提法提取波纹巴非蛤(Paphia undulata)全脏器中的糖蛋白,对其工艺条件进行初步探讨,以供参考。

1材料与方法

1.1试验材料

波纹巴非蛤采自湛江市东风市场,去壳后,于-18℃冷冻备用。

1.2试验方法

1.2.1糖蛋白分离提取方法。原料→匀浆→加浸提液→浸提→冷却→纱布过滤→滤液浓缩至体积的1/4→醇沉→离心→沉淀物用乙醇、丙酮交替洗涤3次→恒温干燥→糖蛋白粗品。

1.2.2检测方法。总糖含量测定采用苯酚-硫酸法;蛋白含量测定采用考马斯亮蓝法。

2结果与分析

2.1不同浸提液浓度对糖蛋白提取效果的影响

分别以蒸馏水(0moL/L NaCl)、0.5moL/L NaCl、1.0moL/L NaCl、1.5 moL/L NaCl等4种溶液作为浸提剂,料液比为1∶10,80℃下浸提60min。检测浸提液中的总糖含量与总蛋白含量,结果如图1所示。4种浸提剂提取液中总糖含量明显高于蛋白含量,蛋白含量为0moL/L NaCl>0.5moL/L NaCl>1.0moL/L NaCl>1.5moL/L NaCl,总糖含量为0.5moL/L NaCl>0moL/L NaCl>1.5 moL/L NaCl >1.0moL/L NaCl,其中以0.5moL/L NaCl溶液的浸提液中总糖与蛋白含量均为最高,分别可达到2.63%和0.94%。

2.2不同料液比对糖蛋白提取效果的影响

采用0.5moL/L NaCl溶液为浸提剂,比较不同的料液比对其提取效果的影响,结果见图2。随着料液比的增大,浸提液中总糖含量与可溶性蛋白含量均先上升后下降,在1∶10料液比中达到最大,分别达到3.92%和0.62%。

2.3不同温度对糖蛋白提取效果的影响

以1∶10(W/V)比例加入0.5moL/L NaCl溶液,分别在50℃、60℃、70℃、80℃、90℃条件下浸提,比较不同温度对糖蛋白提取的影响,结果见图3。随着温度的升高浸提液中的蛋白含量呈上升趋势;而总糖含量呈先上升后下降趋势,在70℃时含量最高。考虑到在高温条件下浸提液中变性蛋白的含量增多,因此选择浸液中总糖含量最高时的温度70℃作为提取温度。

2.4不同浸提时间对糖蛋白提取效果的影响

以1∶10(W/V)比例加入0.5moL/L NaCl溶液,在70℃条件下分别浸提30min、60min、90min、120min,比较不同浸提时间对糖蛋白提取效果的影响,结果见图4。随着浸提时间的延长,浸提液中总糖含量明显高于蛋白含量,在90min时分别为1.71%和1.12%。

2.5正交试验设计与结果

在单因素试验结果的基础上,以盐浓度、料液比、浸提温度与时间为4因素,设计正交试验表(见表1);以浸提液中总糖与总蛋白含量为指标检测糖蛋白的提取效果,结果见表2。

通过R可知4个因素中对波纹巴非蛤中糖蛋白的提取率影响大小次序为:C>A>B>D,最佳的提取条件的水平组合为A2B3C3D2,即:采用0.5moL/L NaCl溶液为浸提剂,料液比1∶12, 75℃浸提90min。

2.6乙醇沉淀分离

将95%乙醇在搅拌下缓慢加入浓缩液中,使乙醇终浓度分别至50%、60%、70%、80%,结果见图5。当乙醇终浓度为60%时得到的糖蛋白中的总糖含量、蛋白含量和得率均达到最大,分别为38.3%、17.1%和1.64%。

3结论

波纹巴非蛤糖蛋白的分离提取工艺条件为:采用0.5 moL/L NaCl溶液为浸提剂,料液比1∶12,75℃浸提90min。浸提液经透析脱盐,60%的乙醇终浓度沉淀得波纹巴非蛤糖蛋白,得率为1.64%,总糖与可溶性蛋白含量分别为38.3%和17.1%。

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