HPLC测定六味地黄颗粒中马钱苷的含量

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(长春中医药大学，吉林 长春 130117)

六味地黄颗粒系由熟地黄、牡丹皮、山茱萸等6位中药材制成的颗粒剂。为了控制六味地黄颗粒的质量，保证临床用药效果，对六味地黄颗粒的含量测定方法进行了研究。本文以马钱苷为指标，采用高效液相色谱法测定其含量，该方法灵敏、重现性好。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 美国Waters 600 Controler高效液相色谱仪;ReliaSil-C18柱；德国Sartorius BP211D(1/10万)电子天平；马钱苷由中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件 色谱柱：ReliaSil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%H3PO4(5：40：20：585)；流速:1.2 mL/min；检测波长：236 nm；柱温:40℃。

1.3 方法 溶液的制备：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)阴性对照品溶液的制备。

2 结果

2.1 线性关系考察 精密吸取马钱苷对照品溶液(20.2 μg/mL)2，4，6，8，10 μL分别注入液相色谱仪，依法测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=6 668.15X+1 315 461.4，r=0.999 9。结果：马钱苷在0.080 8～0.404 0 μg范围内呈良好线性关系。

2.2 精密度试验[1-2]取同一份对照品溶液10 μL，重复进样5次,测得马钱苷峰面积的RSD为1.23%，表明仪器精密度良好。

2.3 稳定性试验 在本实验条件下，取供试品溶液分别在室温避光放置0，2，4，24，36 h后依法测定，按峰面积计算RSD为0.58%，表明马钱苷至少在36 h内稳定。

2.4 重复性试验 精密称取同一批号样品5份，制备供试品溶液，测定马钱苷含量，结果RSD为1.03%。表明含量测定重复性良好。

2.5 回收率试验 精密称取已知含量(2.614 mg/g)样品5份,分别加入一定量马钱苷，制备供试品溶液并进行测定，结果平均回收率为99.96%，RSD为1.72%(n=5)，表明此方法可行。

2.6 样品测定[3]分别取3批(050801、050802、050803)样品，制备供试品溶液，依法测定。结果平均含量为0.72 mg/g。结论：经多次实验，本品中马钱苷含量暂定为每克不得低于0.54 mg。

3 小结

3.1 流动相考察 参照《中华人民共和国药典》2005年版(一部)山茱萸含量测定项下测定马钱苷的流动相及相关文献，通过实验摸索,流动相选用四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%H3PO4(5：40：20︰585)马钱苷具有较好的峰型和相对合理的保留时间和分离度，故选用四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%H3PO4(5：40：20：585)为马钱苷含量测定的流动相。

3.2 样品检测波长 取马钱苷对照品，加甲醇制成每l mL中含马钱苷20.2 μg溶液,作为对照品溶液，进行紫外检测。结果选定测定波长λmax=236 nm。且溶剂、阴性无干扰。

[1]王 海,王卫峰,戴 涌.山茱萸药材中马钱苷的含量测定方法考察[J].西北药学杂志,1998,13(1):42.

[2]李玉红,陈 燕,易进海.HPLC测定马钱苷的含量[J].华西药学杂志,2002,17(4):295.

[3]王 宝.中成药的质量标准物质研究[M].北京:中国中医药出版社,1994:115.